[发明专利]一种利用烟草高效表达IL‑37各亚型成熟蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种利用烟草高效表达IL‑37各亚型成熟蛋白的方法，在信号肽和成熟IL‑37蛋白编码序列之间插入TEV蛋白酶及其酶切位点编码序列形成IL‑37‑TEV 融合基因；根据烟草密码子的偏好性，在保证氨基酸序列不变的情况下，对融合基因序列进行优化；将构建的IL‑37‑TEV 融合基因的5'端上游与常用的启动子包括其他调节区域连接，并在3'端下游与转录终止子连接；将构建的重组表达载体通过转化整合到烟草细胞染色体上，培育高效稳定表达IL‑37 的转基因烟草植株以及通过注射构建的重组表达载体到烟草叶瞬时表达目的蛋白。本发明通过构建植物表达载体,在植物中表达具有高度活性的IL‑37成熟蛋白，所得产品对治疗诸多炎症疾病和炎症疾病的早期检测和诊断具有重要应用价值。

主权项

一种利用烟草高效表达IL‑37各亚型成熟蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 设计IL‑37‑TEV融合基因：包括在信号肽和IL‑37成熟蛋白各亚型编码序列之间插入TEV蛋白酶及其酶切位点编码序列获得融合基因、在IL‑37成熟蛋白各亚型的天然信号肽和TEV蛋白酶序列间添加一段柔性连接肽，所述IL‑37‑TEV融合基因的基本结构顺序为：自身原始信号肽‑柔性连接肽‑TEV蛋白酶‑TEV酶识别位点‑成熟蛋白各亚型IL‑37编码序列；所述IL‑37成熟蛋白各亚型为IL‑37a、IL‑37b、IL‑37c、IL‑37d和IL‑37e，其中， IL‑37a‑TEV融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，IL‑37b‑TEV融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，IL‑37c‑TEV融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，IL‑37d‑TEV融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，IL‑37e‑TEV融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；其IL‑37a‑TEV融合基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，IL‑37b‑TEV融合基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，IL‑37c‑TEV融合基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，IL‑37d‑TEV融合基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，IL‑37e‑TEV融合基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述柔性连接肽序列如SEQ ID NO.11所示；S2. 构建重组表达载体：将步骤S1设计的IL‑37‑TEV融合基因连接到过渡载体PRTL‑2‑Gus，经酶切分离后再克隆到植物表达双元空载体的T‑DNA ，获得IL‑37成熟蛋白各亚型的重组表达载体；S3.表达：将步骤S2构建的重组表达载体导入到烟草中进行表达。