[发明专利]超稳定免疫球蛋白可变结构域的筛选和改造方法及其应用

摘要

本发明涉及被称作Tat相关蛋白质改造工程(TAPE)的方法，通过将靶蛋白和抗生素抗性蛋白连接到Tat信号序列并在大肠杆菌内表达它，筛选具有更高的溶解性和优异的热稳定性的靶蛋白，特别是源自人生殖细胞的免疫球蛋白可变结构域(VH或VL)，以及由TAPE法筛选的、具有溶解性和优异的热稳定性的、人或改造的VH和VL结构域抗体和人或改造的VH和VL结构域抗体支架。还提供了在由TAPE法筛选的人或改造的VH或VL结构域抗体支架中包括随机CDR序列的文库，以及其制备方法。海通了使用该文库筛选的具有靶蛋白质结合能力的VH或VL结构域抗体，包括该结构域抗体的药物组合物。

主权项

一种可溶性VH结构域抗体支架，具有下面的FR1至FR4的氨基酸序列：(1)FR1：X0VQLX1X2X3GX4X5X6X7X8PGX9SX10X11X12X13CX14X15X16GX17X18X19在FR1的氨基酸序列中，X0是E或Q，X1是V或L，X2是E，或Q，X3是S，或A，X4是G，或A，X5是G，M，N，V，或E，X6是L，V，或W，X7是V，K，A，或I，X8是Q，K，或H，X9是G，T，A，R，E，S，或T，X10是L，V，R，或M，X11是R，或K，X12是L，I，或V，X13是S，A，或T，X14是A，E，V，R，I，K，T，或S，X15是A，G，P，V，或T，X16是S，F，或Y，X17是F，Y，R，G，或L，X18是T，A，S，N，T，P，I，N，H，或A，X19是F，L，V，或C；(2)FR2：WX20RX21X22PGX23GX24X25X26X27X28在FR2的氨基酸序列中，X20是V，A，或L，X21是Q，N，R，I，K，Y，V，M，S，Q，W，F，L，V，或C，X22是A，G，K，S，V，M，或T，X23是K，Q，E，R，或T，X24是L，N，I，P，Y，T，V，W，A，R，M，或S，X25是V，或E，X26是W，I，V，P，F，H，M，Y，L，C，或R，X27是V，M，I，或L，X28是S，A，或G；(3)FR3：X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45X46X47X48X49X50X51DX52X53X54YX55CX56X57在FR3的氨基酸序列中，X29是R，H，Q，或T，X30是F，V，L，或I，X31是T，S，或I，X32是I，L，V，M，或R，X33是S，T，或D，X34是R，A，V，N，或I，X35是D，N，或A，X36是N，T，D，I，R，K，Y，或E，X37是A，S，V，或T，X38是K，R，T，Q，V，E，M，N，或I，X39是N，R，T，K，S，D，或V，X40是T，M，S，V，I，Y，或A，X41是L，V，A，或M，X42是F，Y，N，D，H，或S，X43是L，或M，X44是Q，E，H，或N，X45是M，L，V，I，或W，X46是N，T，K，D，Y，I，或S，X47是S或N，X48是L或V，X49是R，K，或T，X50是D，A，S，P，T，V，I，或S，X51是E，A，D，或S，X52是T，N，或S，X53是S，A，或G，X54是V，I，L，或M，X55是Y或F，X56是A，G，V，或S，X57是R，S，K，T，L，N，或F；和(4)FR4：X58GX59GX60X61VTVSS在FR4的氨基酸序列中，X58是W，C，Y，G，S，或A，X59是Q，R，或L，X60是A，T，I，或V，X61是L，M，P，V，或T。