[发明专利]α-淀粉酶的制备方法

摘要

本发明提供了α‑淀粉酶的制备方法，其能解决现有技术中通过枯草芽孢杆菌制备α‑淀粉酶后期纯化步骤繁琐、得到纯品不易的技术问题。其包括以下步骤：（2）在α‑淀粉酶基因上游添加e3 SD序列、下游添加组氨酸标签，获得改造后的α‑淀粉酶基因；（3）将改造后的α‑淀粉酶基因连接到载体pxmj19‑aph213上，获得重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy；（4）将重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy转入谷氨酸棒杆菌，获得重组菌；（5）培养重组菌，分泌表达α‑淀粉酶；（6）α‑淀粉酶的纯化，包括：将含有α‑淀粉酶的上清进行亲和层析，介质为镍柱。

主权项

1.α‑淀粉酶的制备方法，其包括以下步骤：（1）获取枯草芽孢杆菌的α‑淀粉酶基因，所述α‑淀粉酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；（2）在所述α‑淀粉酶基因上游添加e3 SD序列、下游添加组氨酸标签，获得改造后的α‑淀粉酶基因，所述e3 SD序列如SEQ ID NO：2所示；（3）将所述改造后的α‑淀粉酶基因连接到载体pxmj19‑aph213上，获得重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy，所述载体pxmj19‑aph213的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；（4）将所述重组表达载体pxmj19‑aph213‑amy转入谷氨酸棒杆菌，获得重组菌；（5）培养所述重组菌，分泌表达α‑淀粉酶；（6）α‑淀粉酶的纯化，包括：a、将重组菌的培养物进行离心，获得含有α‑淀粉酶的上清；b、将所述含有α‑淀粉酶的上清进行亲和层析，介质为镍柱，获得含有α‑淀粉酶的洗脱液；c、将所述含有α‑淀粉酶的洗脱液进行脱盐，获得纯化的α‑淀粉酶溶液；步骤（6）中，亲和层析中用于平衡、上样的缓冲液A为：300mM NaCl，20mM Tris，pH8.0的缓冲液，用于洗脱的缓冲液B为：300mM NaCl，250mM 咪唑，20mM Tris，pH8.0的缓冲液；步骤（6）中，所述脱盐的介质为脱盐柱。