[发明专利]一种增强婴幼儿免疫力的人工微生态制剂的制备方法

摘要

一种增强婴幼儿免疫力的人工微生态制剂的制备方法，是分离待产母亲阴道分泌物中的益生微生物，经鉴定后制备成为微生物冻干粉，经生理盐水溶解后涂抹于婴幼儿全身，建立和恢复剖腹产婴幼儿对外界的免疫能力和抵抗能力。本发明的优点是直接从待产孕妇阴道分泌物中分离阴道有益菌，将可能的致病菌排除，用于建立和恢复剖腹产婴幼儿身体各部位菌群结构重建，具有安全性高、有效性好、可操作性强等优点。

主权项

一种增强婴幼儿免疫力的人工微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述方法包括下列步骤：A、阴道分泌物的收集：在进行剖腹产手术之前1小时，将一块大小适宜的无菌纱布放置于待产母亲的阴道中10min；B、阴道菌群的保存：将浸有阴道分泌物的纱布浸没于无菌的PBS溶液中，用无菌镊子不断挤压纱布，使纱布中的阴道分泌物分布于PBS中，离心，取沉淀，在沉淀中加入20%甘油，旋涡振荡器混匀，‑8O ℃下保存；C、阴道菌群的分离及鉴定:（1）培养基的制备：配制BSM、MRS、改良的GAM固体培养基和BHI+5%脱脂乳的固体和液体培养基；所述BSM培养基用于培养双岐杆菌，MRS培养基用于培养乳酸菌，改良的GAM培养基用于培养拟杆菌，BHI+5%脱脂乳的固体和液体培养基用于培养总菌；（2）培养方式：将阴道分泌物从‑8O ℃的冰柜中取出，取阴道分泌物加入到无菌的PBS溶液中，按101～108比例稀释；分别取100μL102、104、106涂板，厌氧和需氧条件下培养48h；（3）挑菌接种：于无菌超净工作台中根据平板中菌落的形态、大小、颜色、边缘整齐与否、隆起与否和降解乳糖与否，挑出单菌落接种于相应的液体培养基中；（4）革兰染色：取10μL菌液，涂板于载玻片上，置于电子显微镜下观察菌的形态结构；（5）测序：根据革兰染色的结果选出不同的细菌用于测序，确定阴道分泌物中各种微生物的种属关系；D、具有益生作用微生物的筛选：根据测序结果筛选出具有益生作用的微生物混合并进行培养;E、阴道菌群冻干粉的制备：往菌液中加入等量的20%的灭菌脱脂乳，均匀混合，冷冻干燥后，制成冻干粉;F、阴道益生菌群冻干粉的应用：在新生儿产下前，用无菌的生理盐水溶解冻干粉，配成溶液，待剖腹产新生儿产下1‑3分钟后，用无菌纱布蘸取溶液依次擦拭新生儿的嘴部、面部、肛门身体的其他部位;G、新生儿共生微生物的鉴定：为验证这种分离筛选阴道益生菌群移植的方法是否可以恢复新生儿共生微生物;在新生儿出生的1、3、7、14、21及30天这六个时间点分别在受试母婴的肛门、口腔及皮肤部位共采集了样本，采用16S rRNA测序的方法鉴定其群落组成。