[发明专利]基于酶切循环放大的石墨烯氧化物-DNA传感器的制备方法和在检测凝血酶上的应用

摘要

本发明属于生物医学领域中的蛋白质检测领域，具体涉及一种基于酶切循环放大的石墨烯氧化物‑DNA传感器及其检测凝血酶的方法。主要包括：1)制备石墨烯氧化物；2)把FAM标记的TBA核酸适配体加入到氨基活化的石墨烯氧化物上；3)加入不同浓度的凝血酶，通过石墨烯氧化物表面吸附的核酸适配体标记荧光的强度的变化，进行检测。本发明利用石墨烯氧化物淬灭荧光的特性，采用核酸外切酶Ⅲ识别凝血酶单链核酸适配体(TBA)，将其水解释放凝血酶，从而实现凝血酶循环利用，荧光信号逐渐增强，能高灵敏度、快速、低成本地实现凝血酶的微量检测，通过共价结合和加入聚乙二醇的方法避免非特异性吸附，将石墨烯氧化物‑核酸适配体传感器对凝血酶检测限提高至0.024pM。

主权项

基于酶切循环放大的石墨烯氧化物‑DNA传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备GO：通过改良的Hummers法制备GO，将GO真空干燥备用，使用前，在水溶液中超声分散，得GO分散液；(2)GO的活化：将含有50mM NHS与和200mM EDC的水溶液A与步骤(1)制得的2mg/ml GO分散液混合，再加入超纯水，室温下反应0.5小时后洗脱，储存备用；(3)GO‑aptamer传感器的制备：先连接氨基化的capture DNA到步骤(2)制得的GO表面，再滴加TBA，由于TBA的特异性，与capture DNA结合，再滴加PEG，即制得GO‑DNA传感器。