[发明专利]一种从55天果龄罗汉果中提取及检测罗汉果苷IV、苷V的方法

摘要

一种从55天果龄罗汉果中提取及检测罗汉果苷IV、苷V的方法，采用60%乙醇水溶液加超声波辅助提取，用Ca（OH）2絮凝、过滤、浓缩回收乙醇；采用D101大孔树脂进行分离、纯化：pH为9.0，使用两倍柱体积每小时的流速过柱，依次用纯水、20%乙醇清洗、60%乙醇洗脱；收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥。用HPLC检测，色谱柱条件为C18柱，乙腈‑水溶液为21:79；检测波长203nm；流速1 mL/min，柱温25℃，进样量10µL，跑柱30min。检测时，罗汉果苷IV、罗汉果苷V的吸收峰明显，罗汉果苷IV含量大于5.0%，罗汉果苷V含量大于15.0%，实现罗汉果苷IV、罗汉果苷V同步提取和检测，具有产业化意义。

主权项

一种从55天果龄罗汉果中提取及检测罗汉果苷IV、苷V的方法，其特征在于：包括提取步骤和检测步骤，所述提取步骤如下：1）前处理取55天果龄的新鲜罗汉果为原料，称重、捣碎均匀；得罗汉果浆，备用；2）提取采用60%乙醇水溶液加超声波辅助提取；以质量比例计，料液比1:2，控制温度为50℃，用53Hz的超声波辅助提取；将料液用离心机在2500r/min离心15min，抽滤；滤渣再用60%乙醇水溶重复提取一次；合并滤液，得到罗汉果初提液；3）絮凝用Ca（OH）2乳浊液进行絮凝，加入罗汉果浆质量15%的10%Ca（OH）2乳浊液，进行搅拌絮凝；离心，得到澄清溶液；4）回收乙醇将到得澄清溶液浓缩至流浸膏状态，回收除去乙醇；加入纯水溶解流浸膏，得到提取澄清水溶液；5）层析采用D101大孔树脂对罗汉果提取澄清水溶液进行分离、纯化；先上柱吸附，过柱条件：上样液，将得到提取澄清水溶液调到pH为9.0，使用两倍柱体积每小时的流速过柱；过柱完成后依次用纯水、20%乙醇清洗、60%乙醇洗脱，流速都使用每小时两倍柱体积过柱，60%乙醇洗脱液总用量为 3倍树脂床体积，收集60%乙醇洗脱液；6）减压浓缩，干燥将收集到的60%乙醇洗脱液减压浓缩回收乙醇，得到浓缩液；将浓缩液进一步干燥，得到有高含量的罗汉果苷IV、罗汉果苷V的罗汉果提取物；所述检测步骤如下：用HPLC法检测A 标准品的制备用万分之一天平精确地称量8.2mg 98.56%的罗汉果甜苷V标准品，置于10mL的容量瓶，用甲醇定容至刻度，在25℃下用超声波药品处理机超声15min，溶解；并用微孔滤膜过滤所得溶液，将过滤后的液体置于进样瓶待检测；再精确称量3.0mg 98.79%的罗汉果甜苷IV标准品，处理，置于进样瓶待检测；B 供试品的制备精确称量30mg左右的样品，置于10ml的容量瓶，用甲醇定容，超声波处理15min后，用针筒吸取样品上清液，并经过微孔滤膜处理，将过滤后的样品液置于进样瓶待检测；C 色谱柱条件C18柱（4.6 mm×150mm），乙腈‑水溶液的质量比例为21:79；检测波长为203nm；流速1 mL/min，柱温25℃，进样量10µL，跑柱30min；D 处理流动相将乙腈和纯水分别通过过滤装置，乙腈采用有机系滤膜，纯水采用水系滤膜；将过滤后的液体分装到干净的流动相瓶子，并用保鲜膜封住瓶口，留一个小孔，再超声处理20min；E 样品检测。