[发明专利]一种利用微量通气提高菌株对抑制物抗性的方法

摘要

一种利用微量通气提高菌株对抑制物抗性的方法，通过微量通气提高了对纤维素水解液中多种抑制物(甲酸、乙酸和糠醛、羟甲基糠醛)的抗性，其葡萄糖和木糖的发酵性能明显改善。通过本方法进行的木糖的发酵与未通气对照组相比，具有多种纤维素水解液抑制物耐受性，且在四种较高浓度混合抑制物条件下，发酵时间缩短，剩余木糖大幅度减少，且木糖醇产率提高。通过本方法进行葡萄糖和木糖混合碳源的发酵与未通气对照组相比，在四种较高浓度混合抑制物条件下，具有促进葡萄糖和木糖同时发酵的作用，且乙醇产率保持不变，木糖醇的产率提高。

主权项

1.一种利用微量通气提高菌株对抑制物抗性的方法，其特征在于以下步骤：(1)将马克斯克鲁维酵母菌株进行扩大培养；其中，所述马克斯克鲁维酵母为中国工业微生物保藏中心保藏菌株，菌种编号为1727；培养条件为：控制扩大培养基的pH值4～6，温度25～35℃，转速100～200rpm/min；所用的扩大培养基包括酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖或木糖20g/L；(2)将经过步骤(1)扩大培养后的菌种经离心浓缩，无菌水重悬，接种至发酵培养基中；其中，离心操作速度为5000～10000rpm/min、时间5～8min；微量通气0.1～1.2vvm，初始菌体浓度OD₆₂₀ 1～3，温度30～45℃，转速120～180rpm/min，pH值4～6，发酵72～168h，得到发酵液；OD₆₂₀值使用酶标仪测定；所用的发酵培养基包括重量百分含量为2～10％的葡萄糖以及重量百分含量为1～6％的木糖；(3)对步骤(2)的发酵液组分进行分析；发酵液经0.45μm亲水性微孔滤膜过滤后，使用高效液相色谱分析各组分的量；色谱柱为有机酸分析柱，进样量20μ1，流动相为0.01mmol·L^‑1硫酸溶液，流速为0.5ml·min^‑1，示差检测器温度50℃，柱温50℃；所述的抑制物是甲酸、乙酸、糠醛、羟甲基糠醛中两种以上的混合物。