[发明专利]一种EYFP基因标记根瘤菌的方法在审
| 申请号： | 201610847787.4 | 申请日： | 2016-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN106434726A | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 于徳水;甄涛;张先成;于盛竹;曲娟娟 | 申请（专利权）人： | 黑龙江省科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/65;C12R1/41 |
| 代理公司： | 哈尔滨市伟晨专利代理事务所(普通合伙)23209 | 代理人： | 荣玲 |
| 地址： | 150010 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种EYFP基因标记根瘤菌的方法，所述方法包括以下步骤：一、将EYFP‑pUC19载体酶切纯化后获得EYFP产物；二、将EYFP产物与载体pBBR1MCS‑2相连，酶切验证，将构建的EYFP‑pBBR1MCS‑2转入E.coli DH5α中；三、将供体菌EYFP‑pBBR1MCS‑2、辅助菌pRK2013、受体菌慢生型大豆根瘤菌三亲本杂交；四、同源重组：通过在KmR的平板上生长，筛选重组子；五、PCR验证，确定筛选的重组子已经插入到慢生型大豆根瘤菌的基因组中，而基因组中不含有野生株；六、显微镜下观察EYFP蛋白基因表达。本发明采用同源重组的方法，将EYFP与载体pBBR1MCS‑2连接，通过KmR抗性筛选重组子后，采用PCR法筛选突变株，确保插入染色中，使其稳定表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 eyfp 基因 标记 根瘤菌 方法 | ||
【主权项】：
一种EYFP基因标记根瘤菌的方法，其特征在于所述方法步骤如下：一、将EYFP‑pUC19载体酶切纯化后获得EYFP产物；二、将EYFP产物与载体pBBR1MCS‑2相连，酶切验证，将构建的EYFP‑pBBR1MCS‑2转入E.coli DH5α中；三、将供体菌EYFP‑pBBR1MCS‑2、辅助菌pRK2013、受体菌慢生型大豆根瘤菌三亲本杂交；四、同源重组：通过在KmR的平板上生长，筛选重组子；五、PCR验证，确定筛选的重组子已经插入到慢生型大豆根瘤菌的基因组中，而基因组中不含有野生株；六、显微镜下观察EYFP蛋白基因表达。
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