[发明专利]一种用于纯化凝血酶原复合物的工艺

摘要

本发明提供了一种用于纯化凝血酶原复合物的工艺，包括：将检测合格的健康人血浆通过离心去除沉淀以得到血浆原料；采用DEAE‑Sephadex A‑50凝胶对血浆原料进行吸附，经洗涤、洗脱以得到凝血酶原复合物粗提液；以及通过Capto DEAE凝胶柱层析对凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附，经洗涤、洗脱，从而制得凝血酶原复合物液体。在本发明中，通过采用DEAE‑Sephadex A‑50凝胶和Capto DEAE凝胶两步法制备凝血酶原复合物，所设计的工艺条件下制品纯度远高于传统工艺制备的凝血酶原复合物制品，且凝血因子Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ三因子均衡度好。

主权项

1.一种用于纯化凝血酶原复合物的方法，其特征在于，包括：将检测合格的健康人血浆通过离心去除沉淀以得到血浆原料；采用DEAE‑Sephadex A‑50凝胶对所述血浆原料进行吸附，经洗涤、洗脱以得到凝血酶原复合物粗提液；以及采用Capto DEAE凝胶柱层析对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附，经洗涤、洗脱，从而制得凝血酶原复合物液体；其中，在将所述凝血酶原复合物粗提液用去离子水稀释16‑18倍，以使得稀释后的所述凝血酶原复合物粗提液的电导率为13.5‑14.68 ms/cm后，再通入所述Capto DEAE凝胶柱；其中，在通过所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶对所述血浆原料进行吸附之前，用平衡液预平衡所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶；并且在通过所述Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行进一步吸附之前，用平衡液预平衡所述Capto DEAE凝胶柱；其中，采用DEAE‑Sephadex A‑50凝胶对所述血浆原料进行吸附、洗涤、洗脱过程中：所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.1mo1/L NaCl，余量为水，pH为7.0;所用洗涤液含0.015‑0.02mo1/L柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl，余量为水，pH为6.8‑7.2;并且所用洗脱液含0.0075‑0.015mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl，余量为水，pH为6.6‑7.2；其中，通过Capto DEAE凝胶柱对所述凝血酶原复合物粗提液进行吸附、洗涤、洗脱过程中：所用平衡液含0.02mo1/L柠檬酸钠和0.075‑0.1mo1/L NaCl，余量为水，pH为6.8‑7.0;所用洗涤液含0.015mo1/L柠檬酸钠和0.15mo1/L NaCl，余量为水，pH为7.2;并且所用洗脱液含0.0075‑0.015mo1/L柠檬酸钠和2.4mo1/L NaCl，余量为水，pH为6.6‑7.2;其中，采用DEAE‑Sephadex A‑50凝胶对所述血浆原料进行吸附，经洗涤、洗脱以得到凝血酶原复合物粗提液的步骤进一步包括：将符合药典要求的去除冷沉淀的血浆在4‑6℃条件下，按该血浆重量的2.0‑2.2%加入用所述平衡液预平衡的DEAE‑Sephadex A‑50凝胶，搅拌吸附50‑60分钟，收集所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶；用13‑15倍的所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶的干粉重量的所述洗涤液洗涤所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶1‑3次，每次搅拌10‑20分钟；以及用17‑18倍的所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶的干粉重量的所述洗脱液洗脱所述DEAE‑Sephadex A‑50凝胶1‑3次，每次搅拌10‑20分钟放干，收集洗脱后的蛋白洗脱液。