[发明专利]纤维低聚糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种纤维低聚糖的制备方法，属于生物技术领域。本发明使用特殊的蛋白酶、特殊的淀粉酶高效脱除纤维素原料中残存的蛋白质、淀粉，使用碱液脱除残存的半纤维素、木质素、灰分硅质等，得到了纯净纤维素；在此基础上，使用特殊培养基发酵木霉生成的纤维素酶，在该特殊的培养基中，木霉的生长减慢9.1%，但二种葡聚糖酶的分泌量和酶活力没有发生任何变化；而BG的分泌量和酶活力减少了97%。因而，在使用该特殊培养基发酵木霉所生成的纤维素酶系组成中，主要为本发明所需要的二种葡聚糖酶，从而可以高得率、高效地获得优质纤维低聚糖。本发明技术成熟、工艺衔接性好，对设备要求较低、投入少、得率高、易于工业化生产。

主权项

1.一种纤维低聚糖的制备方法，其特征在于，包括步骤：/n1）将粗纤维素置于汽爆分离器中，加入纤维素质量1-20倍的水，并加入复合蛋白酶，间歇1-3分钟，通入惰性气体，酶解10-80分钟；随后加入常温型α-淀粉酶，酶解10-80分钟；然后通入蒸汽升温至60-70℃，保温2-20分钟，灭活酶的活性；所述复合蛋白酶由具备内肽酶活性的碱性蛋白酶和具备端肽酶活性的蛋白酶K组成；所述常温型α-淀粉酶由微波诱导所得变异地衣芽孢杆菌分泌所得α-淀粉酶，所述常温型α-淀粉酶的适宜温度为22-35℃；所述复合蛋白酶中具备内肽酶活性的碱性蛋白酶与具备端肽酶活性的蛋白酶K的比例为1:1-3；所述复合蛋白酶的加入量满足每千克干基纤维素400-800U，所述常温型α-淀粉酶的加入量满足每千克干基纤维素300-700U；/n2）灭酶后，向汽爆分离器中加入碱至碱液质量浓度为5-25%，接着向汽爆分离器中通入水蒸汽至温度升至85-95℃后，停止通水蒸汽；向汽爆分离器中通入惰性气体，将汽爆分离器内空气排净，封口；然后间歇性向汽爆分离器内通入水蒸汽以及惰性气体，以维持汽爆分离器内温度为80-110℃，压力为0.5-2MPa，保温保压10-120分钟后喷放；/n3）喷放浆状物趁热固液分离，得滤渣一和滤液一；/n4）采用酸性的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液对滤渣一反复洗涤、分离，得滤渣二和滤液二；向滤渣二中加入1-5质量倍数的所述Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，滤渣二于悬浮状态保存、备用；/n5）将步骤4）所得滤渣二的悬浮液置于酶解罐，并向所述酶解罐中继续加入所述Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，调节pH为4.5-5.5；然后加入采用新型培养基发酵木霉所得到的纤维素酶，于30-65℃下酶解8-30小时，酶解完毕后灭酶；所述新型培养基的组成为马铃薯汁、碳酸钙；/n6）去除步骤5）酶解后混合物中的颗粒物，得上清液；所述上清液经活性炭和硅藻土组成的层析柱过滤，分别以水以及梯度浓度的乙醇水溶液作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液；/n7）通过微滤、纳滤、超滤、反渗透的方法去除所述洗脱液中的无机盐以及分子量小于300并大于2000的组分，然后经浓缩、干燥，即得纤维低聚糖晶体。/n