[发明专利]牛副流感病毒3型HN蛋白核酸适配体及其筛选方法

摘要

本发明涉及一种牛副流感病毒3型HN蛋白核酸适配体及其筛选方法，属于生物工程领域。本发明通过微孔板法不同轮次筛选获得多条HN蛋白的核酸适配体候选物，选择测序结果出现频次较高的适配体，用I‑ELAA法测定了其与HN蛋白的结合力，三条适配体W‑32、W‑33和W‑34的KD值分别为56.57±2.7nM、24.64±2.84nM和31.3±3.32nM，二级结构预测显示核酸适配体均具有稳定的颈环状或发卡状结构，说明本次筛选的三条适配体均能与HN蛋白特异、稳定的结合，可用于后续检测BPIV3抗原或抗体的酶联适配体法的建立。

主权项

牛副流感病毒3型HN蛋白核酸适配体筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：设计和合成初始寡核苷酸文库及用于PCR扩增的上游引物和下游引物；步骤二，包被：吸取HN蛋白溶液包被于微孔板中；步骤三，洗板：甩去包被液，洗涤微孔板，甩干；步骤四，封闭：向微孔中加入含BSA 的HEPES液，孵育；步骤五，加核酸适配体文库：甩去封闭液，用HEPEST洗涤，甩干，将溶解的初始寡核苷酸文库加入到封闭好的微孔中，孵育；步骤六，洗板：甩去寡核苷酸文库，洗涤微孔板，拍干孔中残留的洗涤液；步骤七，洗脱：向微孔中加入核酸洗脱液，孵育；步骤八，提取：吸出洗脱液，提取洗脱液中的核酸适配体；步骤九，PCR：对步骤八提取的核酸适配体分别进行一轮对称PCR和一轮非对称PCR；步骤十，胶回收：回收PCR产物；步骤十一，反筛：从第5轮起开始进行反筛，封闭后，将非对称PCR回收的核酸适配体加入反筛孔，孵育后将上清吸出，加入包被有HN蛋白的微孔中孵育。