[发明专利]腹泻性贝毒毒素的液相色谱‑串联质谱检测方法

摘要

本发明公开了一种腹泻性贝毒毒素的液相色谱‑串联质谱检测方法，包括下列步骤：（一）样品前处理、（二）HPLC‑MS/MS质谱检测。本研究建立9种代表性DSP毒素OA、DTX1、DTX2、PTX2、YTX、hYTX、GYM、SPX1和AZA1的液相色谱‑串联质谱(LC‑MS/MS)检测方法，该方法具有灵敏、高效和准确等特点，对DSP各毒素成分具有很强的定性、定量检测能力，以期有效弥补现有传统检测方法的弊端。

主权项

腹泻性贝毒毒素的液相色谱‑串联质谱检测方法，其特征在于，包括下列步骤：(一)样品前处理(1)样品提取流程如下：称取均质后的试样2.00g，置于50mL离心管中，加入80％乙腈水溶液8.0mL、2‑8g氯化钠和2‑8g氯化钙，超声提取5‑10min后，7000r/min离心10min，取上清液备用；在离心管中继续加入30mL 30％乙醇水溶液和2‑8g氯化钙，涡旋振荡5min，然后超声提取5‑10min，以5000r/min离心5min，取上清液备用；将两次上清液合并，取2mL上清液，加入6mL超纯水稀释，共计8mL提取液待净化；(2)样品净化流程如下：先后以3mL乙腈、3mL水平衡固相萃取柱，8mL提取液全部过柱，流速1‑3mL/min，以3mL 20％乙腈水溶液进行淋洗，充分吹干淋洗液，以1mL含有0.1％甲酸的乙腈洗脱，洗脱液待质谱检测；(二)HPLC‑MS/MS质谱检测质谱检测条件(1)液相条件Waters Atlantis dC₁₈反相色谱柱(150mm×2.1mm，5μm)；柱温30℃；进样量10μL；流动相A为水，B为95％乙腈水溶液，两者皆含有0.05％甲酸和2mmol/L甲酸铵。流动相洗脱条件如下表所示：梯度洗脱条件(2)质谱条件离子源:电喷雾离子源；扫描方式:ESI‑/ESI+切换扫描；检测方式：多离子反应监测；离子源参数:碰撞气(CAD)10MPa，气帘气(CUR)10MPa，电喷雾电压(IS)4500V(‑4500)，离子源温度(TEM)600℃；定性、定量离子对，去簇电压和碰撞能量见下表：*为定量子离子。