[发明专利]大米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化‑高效液相色谱检测方法

摘要

本发明公开了一种大米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化‑高效液相色谱检测方法，包括下列步骤：（1）标准工作溶液的配置；（2）样品前处理；（3）液相色谱检测。本发明采用免疫亲和柱净化结合高效液相色谱法对大米中的DON、NIV同时进行检测，该方法操作简便、定量准确、重复性好。而且，与现有技术相比，本发明通过改进样品前处理工艺，回收率大大提高。

主权项

大米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化‑高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)标准工作溶液的配置将DON和NIV标准原液氮气吹干，以空白大米基质提取液分别配置成0、0.1、0.5、1.0、2.0μg/mL的标准工作液；(2)样品前处理取大米样品500g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内，密封4℃保存；称取3g试样于50mL离心管中，加入30mL 60％乙腈水溶液、2‑8g氯化钠和2‑8g氯化钙，振荡提取30min，以5000r/min离心5min，取上清液备用；在离心管中继续加入30mL30％乙醇水溶液和2‑8g氯化钙，振荡提取30min，以5000r/min离心5min，取上清液备用；将两次上清液合并，取10mL上清液于50mL离心管中，加入10mL乙腈饱和正己烷溶液，涡旋混匀3min，5000r/min离心2min，弃去上层正己烷层，于45℃氮气吹干，加5mL水充分溶解残渣，待净化；将提取液全部缓慢通过免疫亲和柱，流速2～3mL/min，此过程中不要吹干免疫亲和柱，随后以10mL超纯水淋洗免疫亲和柱，吹干免疫亲和组30s，最后以4mL甲醇乙腈溶液(1:3)洗脱DON和NIV，洗脱液氮气吹干，以1mL10％乙腈水溶液定容；(3)液相色谱检测条件是：流动相：10％乙腈水溶液，流速：0.9mL/min，柱温：30℃，检测波长：218nm，进样量：50μL。