[发明专利]一种同源精子诱导中华鲟雌核发育的方法

摘要

本发明属于人工诱导中华鲟单性生殖领域，特别是涉及一种遗传灭活的中华鲟同源精子诱导中华鲟卵子进行雌核发育的方法。包括中华鲟精子遗传物质灭活、中华鲟卵采集及中华鲟精子的授精操作、中华鲟受精卵的染色体加倍处理、雌核发育诱导卵的培育、雌核发育苗种的鉴定方法。利用本发明可以生产高度纯合的中华鲟苗种，为中华鲟全基因组测序研究提供实验材料，为生产单一性别中华鲟苗种提供种源，并且为揭示中华鲟性别决定机制提供材料和进一步研究单性繁殖保护提供技术支持。

主权项

一种同源精子诱导中华鲟雌核发育的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）中华鲟精子遗传物质的灭活：采集中华鲟精子，选取活力在80%以上的中华鲟精子与精子稀释液混合，于0‑2℃预冷的培养皿中，进行紫外线灭活；（2）中华鲟卵子采集及与中华鲟灭活精子授精：选择成熟的中华鲟雌鱼，水温18‑19.5℃，人工注射LHRH‑A2催产，在效应时间来临时采用腹部挤压的方法采集卵子，用所述步骤（1）灭活后精子进行授精，精子洒在卵上进行卵受精，加入养殖用水摇匀，再加水洗涤，放入含有滑石粉养殖用水的脱粘瓶中进行充气脱粘处理；（3）热休克加倍处理：在步骤（2）脱粘处理一段时间后，进行热休克处理；（4）雌核发育卵的培育：步骤（3）结束后的卵继续脱粘，脱粘结束后放入喷淋式孵化筛进行孵化培育；（5）雌核苗的分子鉴定：利用微卫星DNA标记筛选的方法，筛选使用灭活精子的亲鱼特异等位基因的微卫星位点，不少于两对；完成同源精子诱导中华鲟雌核的发育。