[发明专利]一种利用聚乙烯亚胺提高热激法质粒转化大肠杆菌感受态效率的方法在审
| 申请号： | 201610867378.0 | 申请日： | 2016-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN106434723A | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 刘楠辛;戚智青;张云威;刁勇;李招发;齐晓雪;李梦琳 | 申请（专利权）人： | 华侨大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70 |
| 代理公司： | 泉州市文华专利代理有限公司35205 | 代理人： | 张浠娟 |
| 地址： | 362000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，公开一种利用聚乙烯亚胺提高热激法质粒转化大肠杆菌感受态效率的方法，包括以下步骤：制备感受态细胞；配置浓度为10‑7v/v‑10‑8v/v的PEI溶液备用；在转化体系中加入所述的聚乙烯亚胺溶液进行转化和克隆，得到重组的DNA分子克隆。本发明可以显著提高热激法质粒DNA转化E.coli BL21(DE3)的效率，填补了将化合物，如聚乙烯亚胺PEI作为增效剂应用于提高转化效率这一领域的空白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 聚乙烯 亚胺 提高 热激法 质粒 转化 大肠杆菌 感受态 效率 方法 | ||
【主权项】：
一种利用聚乙烯亚胺提高热激法质粒转化大肠杆菌感受态效率的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、用感受态细胞试剂盒制备E.coli BL21(DE3)感受态，每管100ul，备用；步骤2、配制浓度为10‑7v/v‑10‑8v/v的PEI溶液，备用；步骤3、在100ul的E.coli BL21(DE3)中加入1ug质粒DNA，加入1ul步骤2配制好的PEI溶液，依次进行冰浴30min，42℃水浴70s，冰浴5min，置于超净台内，加入900ul SOC培养基，37℃、225rpm培养1h，对培养物进行离心，弃去上清后再用150‑200ul培养基重悬菌体涂布加入氨苄的固体平板培养基，37℃过夜培养。
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