[发明专利]一种重组谷氨酰胺转氨酶的生产方法

摘要

本发明公开了一种重组谷氨酰胺转氨酶的生产方法，包括以下步骤：1）重组谷氨酰胺转氨酶的发酵，2）发酵后细胞的收集及裂解，3）包涵体的获得及纯化，4）谷氨酰胺转氨酶的复性。在发酵过程中采用高温培养和诱导将目的蛋白以包涵体形式存在，防止其在细胞内产生交联反应而影响菌体的正常生长，同时增加了目的蛋白的表达量以及降低代谢副产物的抑制作用，通过此生产方法提高了原料的利用率，从而降低生产成本，并且工艺简单，获得的谷氨酰胺转氨酶质量高成本低，适合应用到工业化生产中。

主权项

一种重组谷氨酰胺转氨酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：1）重组谷氨酰胺转氨酶的发酵：将含有谷氨酰胺转氨酶基因的重组大肠杆菌在发酵培养基中37℃培养至OD600=2~3时，加入IPTG诱导培养，得发酵液；2）细胞的收集及裂解：将步骤1）的发酵液离心收集菌体，按质量体积比为1:10~15的比例加入裂解缓冲液，利用高压均质机在4℃下将细胞裂解，裂解结束后将匀浆液离心，收集沉淀；3）包涵体的纯化：将步骤2）的沉淀按1:10‑15（m:v）的比例加入包涵体洗涤缓冲液 I，裂解，离心，收集沉淀，然后再将沉淀按1:10‑15（m:v）的比例加入包涵体洗涤缓冲液I，裂解，离心，收集沉淀，然后再将沉淀按1:10‑15（m:v）的比例加入包涵体洗涤缓冲液II，裂解，离心，收集沉淀，最后将沉淀加入包涵体溶解液中，裂解，离心，保留上清，即可得纯化的谷氨酰胺转氨酶包涵体；4）包涵体的复性：将步骤3）的上清透析于复性缓冲液中复性，复性结束将样品透析于最终储存缓冲液中，得到可溶性活性蛋白。