[发明专利]一种中国美味蘑菇（Agaricussinodeliciosus）的鉴定方法

摘要

本发明涉及一种中国美味蘑菇(Agaricus sinodeliciosus)的鉴定方法，包括：(1)外部形态；(2)微观结构；(3)化学试剂检测；(4)分子序列鉴定。本发明通过采用外部形态特征、解剖结构颜色变化、化学试剂和分子序列鉴定相结合的方法对中国美味蘑菇(A.sinodeliciosus)进行鉴定，具有鉴定准确性高、定位准确的优点，在我国蘑菇(Agaricus sp.)品种的鉴定中具有代表性，具有良好的应用前景。

主权项

一种中国美味蘑菇(Agaricus sinodeliciosus)的鉴定方法，包括：(1)外部形态鉴定中国美味蘑菇(A.sinodeliciosus)外部形态包括：10‑35cm大的菌盖，5‑20cm粗的菌柄，由粉红色、肉色变化成褐色至暗黑色的菌褶，位于菌柄上部的菌环以及整个子实体全部埋生于地下45‑55公分且周围有树木生长；(2)解剖鉴定将中国美味蘑菇从菌盖和菌柄的中间剖开，静置，剖面由白色变为粉红色；(3)化学试剂鉴定取事先配制好的5％KOH溶液，滴于新鲜中国美味蘑菇子实体菌盖表面，静置，KOH溶液滴定处变为浅黄色；(4)分子序列鉴定①DNA提取：提取总DNA，测定浓度后调节至100ng/μL备用；②PCR扩增：选用正向引物ITS5和反向引物ITS4扩增中国美味蘑菇核糖体RNA部分18S、ITS1、5.8S、ITS2和部分28S的DNA片段；反应体系：总量20μL，包含有Taq酶5U、10mmol/L dNTP 2.5μL、10×PCR扩增缓冲液5μL、10μmol/L引物各2.5μL、模版DNA 100ng；PCR反应程序：94℃预变性5min，30个循环中94℃50s、51℃50s、72℃1min，最后72℃延伸10min；③PCR测序：经ITS扩增片段进行双向测序，测序结果经过比对拼接后确定最终序列；④ITS序列分析：将测序好的序列利用NCBI中的Genebank中准确可靠的序列进行Blast比对，通常序列相似度大于99％，即可判定为同一种；经上述步骤(1)～(4)的鉴定，确定为中国美味蘑菇。