[发明专利]一种测定中华鳖体内姜黄素类化合物含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定中华鳖体内姜黄素类化合物含量的方法，步骤是：A、中华鳖血浆、肌肉和皮肤采用溶液A提取；B、将提取液挥干；C、用溶液溶解氮吹后的残渣，加入试剂；D、吸取下层液体过聚醚砜水系滤头，过滤液放置到瓶中，测定；E、超高效液相色谱分析：流动相的有机相为试剂，水相为溶液，溶液与试剂两者的体积比，流速，柱温，获得峰面积；F、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素标准溶液的质量浓度和峰面积分别为横坐标，纵坐标，绘制标准曲线；G、测定中华鳖血浆、肌肉和皮肤中的含量。操作方便快捷，分析时间短，准确性和灵敏度高。适于快速准确测定中华鳖体内组织中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量。

主权项

1.一种测定中华鳖体内姜黄素类化合物含量的方法，其步骤是：A、中华鳖血浆、肌肉或皮肤组织中姜黄素类化合物采用4～5mL溶液A提取，涡旋28－32s，再加入0.5～1.0g试剂B，涡旋28－32s，7000r/min，离心4－6min，上层液体转移到至10mL离心管中，残渣重复提取一次，合并二次的提取液；B、将提取液置48－52℃氮吹仪上将提取液挥干；C、再用1mL溶液C溶解氮吹后的残渣，加入0～0.5mL试剂D，涡旋28－32s，8000r/min，离心4－6min，用移液器将上层液体弃去；D、用1mL注射器吸取下层液体过0.22μm聚醚砜水系滤头，过滤液放置到2mL进样瓶中，超高效液相色谱测定；E、超高效液相色谱分析条件：流动相的有机相为试剂E，水相为溶液F，有机相与水相比为1:1～4:3；流速为0.3mL/min，柱温为28－32℃，检测波长为428nm，色谱柱：超高效液相色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18，进样量为5.0μL，采用双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素标准曲线方程计算中华鳖血浆、肌肉和皮肤中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量，获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的色谱图，通过色谱图积分得出双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的峰面积；F、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素标准溶液的质量浓度分别为横坐标x₁，x₂，x₃，双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积分别为纵坐标y₁，y₂，y₃，绘制双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的标准曲线，获得双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的准曲线方程；G、测定中华鳖血浆、肌肉和皮肤组织中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值代入标准曲线方程中，计算得到中华鳖血浆、肌肉和皮肤组织中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的含量；所述的溶液A是乙腈：含0.01％体积比乙酸；所述的试剂B是无水硫酸钠、无水硫酸镁、固相萃取C18填料、固相萃取PSA填料中的任一种试剂；所述的溶液C是试剂E和溶液F按体积比1:1～4:3混合而成的溶液；所述的试剂D是正己烷、乙醚、乙酸乙酯、正庚烷、环己烷中的任一种试剂；所述的试剂E是乙酸乙酯、乙腈、甲醇、乙醇中的任一种试剂；所述的溶液F是0.1％体积比甲酸水溶液、0.1％体积比乙酸水溶液、0.01％体积比甲酸水溶液、0.01％体积比乙酸水溶液中的任一种试剂。