[发明专利]一种基于挥发性代谢物的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法

摘要

本发明提供了一种基于挥发性代谢物的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法，其特征在于：采用气相色谱串联质谱对新鲜烟叶样品中十五醛和维生素E含量进行相对定量分析，计算其比值，对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别，本发明具有准确可靠，简单可行的优点，可为烟草代谢特征分析及相关烟草代谢组学研究提供借鉴。 1

主权项

1.一种基于挥发性代谢物的烟草代谢组学中新鲜烟叶样品质量的判别方法，其特征在于：采用气相色谱串联质谱对新鲜烟叶样品中十五醛和维生素E含量进行相对定量分析，计算其比值，对代谢组学研究中的新鲜烟叶样品质量进行判别；具体方法如下：

1）称量100~110 mg冻干后新鲜烟叶粉末置于离心管中，加入3mL超纯水、3mL甲基叔丁基醚、以及50μL的1mg/mL氘代苯乙酮的内标溶液, 震荡提取2h后，静置10min后取上清液1mL，经0.45μm滤膜过滤后直接采用GC‑MS进行测试分析；分析步骤如下：GC‑MS分析数据可定性新鲜烟叶中的十五醛和维生素E，通过测定十五醛、维生素E以及内标氘代苯乙酮的峰面积响应，对新鲜烟叶样品中十五醛和维生素E进行相对定量，将十五醛和维生素E相对定量的结果求比值，并作为区分代谢组学合格样品及变质的不合格样品的标准，即待测样品中十五醛和维生素E含量的比值在0.35以下的为合格样品，可用于代谢组学分析，十五醛和维生素E的比值在2以上的为变质的不合格样品，其比值处于0.35与2之间的为部分合格样品；

2）GC/MS分析方法的气相色谱参数：色谱柱：DB‑5ms，规格为30m×0.25mm×0.25μm ；色谱柱前接脱活预柱，规格为1m×0.25mm×0.25μm；载气：He；进样口温度：290℃；进样量：1μL；不分流进样；程序升温：以5℃/min的速度从50℃升至300℃(10min)；

3）GC/MS分析方法的质谱参数：传输线温度 280℃，电离电压：70ev；扫描模式：选择离子模式（SIM）；选择离子如下：氘代苯乙酮（IS）（110），3‑己烯‑1‑醇（67），对二甲苯（91），2,3‑辛二酮（99），对薄荷烯（95），柠檬烯（68），苯甲醇（109），苯乙醛（91），4‑甲基苯甲醛（119），苯乙醇（91），2,3‑二氢‑3,5二羟基‑6‑甲基‑4(H)‑吡喃‑4‑酮（144），4‑甲基苯乙酮（119），2,3‑二氢苯并呋喃（120），3,5‑二甲基苯甲醛（133），5‑乙酰基甲基‑2‑糠醛（126），E‑5‑异丙基‑8‑甲基‑6,8‑壬二烯‑2‑酮（93），1,1,6‑三甲基‑1,2‑二氢萘（157），1,2,3,4‑四氢‑1,1,6‑三甲基萘（159），2,6‑二甲基萘（156），十五醛（82），3,7,11,15‑四甲基‑2‑十六碳烯（70），新植二烯（95），2,6,10,14‑四甲基‑2‑十六碳烯（70)，植醇(81)，十六酸甲酯（87），7‑羟基‑6‑甲氧基‑2H‑1‑苯并吡喃‑2‑酮（192），亚油酸甲酯（294），亚麻酸甲酯（296），十八酸甲酯（298），二十七烷（57），二十八烷（57），二十九烷（57），2‑甲基‑二十九烷（57)，三十烷（57），三十一烷（57），三十二烷（57），三十三烷（57）。

2.根据权利要求1所述判别方法，其特征在于：所述冻干后新鲜烟叶粉末为大田采摘的新鲜烟叶，经‑196℃液氮罐保存运输，液氮冷冻研磨并冻干后，在‑80℃冰箱保存待用的烟叶末。