[发明专利]一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法

摘要

一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法，包括如下步骤（1）生根培养基配制、（2）组培苗培养条件、（3）生根培养、（4）炼苗、（5）移栽。本发明的优点是本发明采用二步生根法对朝鲜蓟组培苗生根，使根系的诱导和生长分开，而每一步使用的培养基配方，都是朝鲜蓟组培上的首创。通过采用白色牛皮纸，大大降低瓶内的湿度，玻璃化现象有效遏制。这种羊皮纸透气很好，大多用于水稻、油菜等作物的套袋育种中，而且该纸可有效阻止外界的霉菌等进入，不会对瓶苗造成污染。增加琼脂粉用量以及遮光处理，这对降低玻璃化和增加生根率都非常有效。生根率提高，从20%提高到86%。瓶苗驯化成活率提高，从65%提高到92%。

主权项

一种朝鲜蓟品种LORCA（劳卡）二步生根方法，其特征在于，包括如下步骤：（1） 生根培养基配制（1.1）母液配制及保存选用化学纯或分析纯的化学药品，根据MS培养基配方，大量元素配成20倍，其中CaCl2单独配成40倍；微量元素配成100倍；铁盐配成100倍；有机物配成100倍，其中肌醇单独配成100倍；L‑酪氨酸配成20倍，NAA配成0.1mg·mL‑1，6‑BA配成0.1mg·mL‑1将所有母液保存在4℃的冰箱里；（1.2）培养基配制第一步生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg·L‑1+6‑BA0.6mg·L‑1+ L‑酪氨酸50mg·L‑1+活性炭2.0g·L‑1+肌醇50mg·L‑1，琼脂粉7 g·L‑1，白糖20 g·L‑1，pH 5.5；第二步生根培养基：MS+肌醇50mg·L‑1，琼脂7 g·L‑1，白糖40 g·L‑1，pH 5.5；琼脂粉采用凝胶强度>1300g/cm2的琼脂粉，每升用量5克；培养基采用240ml玻璃培养瓶分装，不使用普通的透气瓶盖，采用14×14cm的白色牛皮纸，再使用白色棉绳扎紧瓶口；（1.3） 培养基灭菌瓶装培养基在10h内完成灭菌，灭菌方式采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃条件下灭菌20min～30min；锅内的灭菌物不超过锅的容量3/4，高压灭菌时锅内使用蒸馏水；（1.4） 培养基保存灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，2℃～4℃条件下14d内使用；培养基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘；（2） 组培苗培养条件培养室的温度控制在25℃±3℃，相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为27μmol•m‑2•s‑1～36μmol•m‑2•s‑1，光照时间为12h/d；（3）生根培养（3.1） 第一步生根培养将诱导出的朝鲜蓟丛生芽，高1.5厘米以上的芽切割下来，移入第一步生根培养基中；移栽完毕后，放入组培培养架上，关掉培养架上的灯，并用报纸将瓶苗盖上，遮光2天；（3.2）第二生根培养 15‑20天后，有一小部分瓶苗长出白色的根；如果根系长度不到0.5㎝，一律接种到第二步生根培养基中；若根系长度在0.5㎝以上或者根系的数量在3条以上，就留下来直接驯化；（4） 炼苗（4.1） 炼苗标准当幼苗发育到2～3 片叶、3～5 条根，叶片1～2 cm 长、根长0.5～1cm时，即可进行炼苗处理；（4.2） 组培苗驯化将装组培苗的培养瓶从培养架上取下，迅速转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃～25℃，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水，以保湿降温，封口炼苗1d～2d；（4.3） 开瓶锻炼封口炼苗后打开瓶口，向瓶内注入超过培养基表面0.5cm高的自来水，温度控制在20℃～25℃，2d～3d后即可移栽；（5） 移栽（5.1）基质准备栽培基质采用草炭土和珍珠岩，按5:2比例配制；新基质不需要消毒，使用过的基质用使用2000倍高锰酸钾溶液浸泡12h，使用128孔穴盘种植幼苗；（5.2） 移栽种植移栽前，用自来水把根系上的培养基冲洗干净，用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再栽入已准备好的基质中；栽后将基质浇透水，随即拱膜保湿，7～l0天后揭膜通风炼苗；（5.3） 病虫害管理苗期病害为立枯病，防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作药土防治，或50%多菌灵、70%甲基硫菌灵作药土防治，每平方米用药8～9克；幼苗发病前期喷药防治，选用70%土菌消（恶霉灵）可湿性粉1000倍液，或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液，隔周喷施，共喷两次；虫害主要是蚂蚁，防治方法：在育苗床周边撒一圈百虫灵作为驱蚁药；（5.4） 大田移栽标准当苗高8～10cm，叶片3～4时，带基质移栽到大田。