[发明专利]川贝母多糖的提取与分离纯化工艺

摘要

本发明公开了一种川贝母多糖的提取与分离纯化工艺，本发明采用超临界CO2萃取新技术，克服了常规方法存在的提取率偏低、纯度不高等缺点；季铵盐十六烷基氯化吡啶能与贝母多糖在低离子强度的水溶液中沉淀出来，当高离子强度时，沉淀又可以溶解、解离、释放，纯化效果好；利用DEAE‑Sephadex离子交换层析，进一步去除一些不带电和带正电荷的杂质，分离纯化效果更好。

主权项

1.川贝母多糖的提取与分离纯化工艺，其特征在于，包括如下步骤：（1）川贝母多糖粗品的提取（1.1）萃取：取川贝母鳞茎，烘干并粉碎至粒径小于60目，将粉碎后的川贝母鳞茎放至超临界CO2萃取釜中，封釜，排除空气，通入携带剂进行萃取得提取液，萃取温度为47.3℃，萃取压力为23.7 MPa，萃取二氧化碳流量为20‑28L/h，携带剂为蒸馏水，用量为390 ml/kg，萃取2.5h；（1.2）脱色：将步骤（1.1）所得提取液用1mol/L NaOH调至pH 7.8，并加入硅藻土加热煮沸5min脱色，减压过滤得滤液，所加入硅藻土与提取液的质量比为1.5%；（1.3）浓缩干燥：将步骤（1.2）所得滤液于75℃水浴条件下减压浓缩至原体积的30%，再加入4倍体积的95wt%乙醇，搅拌，在3000r/min条件下离心10min得沉淀I，沉淀I分别用无水乙醇和乙醚洗涤，真空干燥得川贝母多糖粗品；（2）川贝母多糖粗品的纯化（2.1）除蛋白：以质量体积比1%取川贝母多糖粗品及蒸馏水并混合均匀，3000r/min离心10min除去不溶物，取上清液加入1/5体积的氯仿和戊醇混合液，3000r/min离心10min得上层清液I，所述混合液中氯仿和戊醇的体积比为5:1；（2.2）纯化：向上层清液I加十六烷基氯化吡啶至沉淀完全，静置5h，3000r/min离心10min得沉淀II，沉淀II用70℃热水洗涤三次，然后向沉淀II加入2mol/L的 NaCl溶液在60℃温度条件下解离4h，并在3000r/min离心10min得上层清液II；（2.3）离子交换层析进一步纯化：将上层清液II通过DEAE‑Sephadex柱吸附，冰水洗至澄清，用0.1mol/LNaCl洗脱，流速为0.2ml/min，收集洗脱液；（2.4）透析、浓缩、干燥：将步骤（2.3）所得洗脱液使用蒸馏水透析18h，将所得透析液在75℃水浴条件下减压浓缩至原体积的30%，再加入4倍体积的95wt%乙醇，搅拌，3000r/min离心10min得沉淀III，沉淀III分别用无水乙醇和乙醚洗涤，真空干燥，得精制川贝母多糖。