[发明专利]一种动物固体排泄物中克伦特罗的测定方法

摘要

本发明公开了一种动物固体排泄物中克伦特罗的测定方法，通过对待测样品前处理改进并且和检测条件的改进，采用高效液相色谱串联质谱法进行测定，无需酶解过夜，该前处理方便快捷，回收率稳定，可准确测定动物排泄物中的克伦特罗含量，并且该方法操作时间短、重复性好、灵敏度高。

主权项

一种动物固体排泄物中克伦特罗的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：(1)首先对待测样品进行前处理，具体处理过程如下：A.配制不同浓度的标准品溶液：制备标准储备液：准确称取克伦特罗标准品，用甲醇配制成浓度为100μg/L的标准储备液，保存于18℃冰箱中；制备同位素内标储备溶液：内标物克伦特罗‑D5用甲醇配制成浓度为100μg/L的标准储备液，保存于18℃冰箱中；然后将标准储备液用甲醇配制成浓度分别为0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL的标准品溶液备用；B.提取称取3g精确至0.01g的待测样品置于50mL离心管中，加入100ng/mL克伦特罗内标溶液150μL，在加标回收样品中另加入100ng/mL克伦特罗标准溶液75μL，再加入1％醋酸乙腈溶液15mL，涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min后在转速为4000r/min离心机中离心5min；C.净化将离心后得到的上清液全部转移到准备好的净化管中，涡旋混匀5min，在转速为4000r/min离心机中离心5min，用移液枪准确吸取5mL上清液移入10mL离心管中，然后将离心管放入40℃水浴中氮气吹干；D.复溶向吹干的离心管中加入0.5mL定溶液，超声处理30s后再涡旋混匀5min，过0.22μm复合滤膜，于进样小瓶中准备上机；所述定溶液为含0.1％甲酸的10％甲醇水溶液；(2)然后采用高效液相色谱串联质谱法对待测样品进行定性和定量检测：A、将配制的不同浓度的克伦特罗标准品溶液，用高效液相色谱‑质谱联用仪分析检测，检测条件与待测样品溶液相同，获得标准品溶液中克伦特罗和克伦特罗内标的定量离子色谱峰面积；B、取5.0μL待测样品溶液进样，用高效液相色谱‑质谱联用仪分析检测，得到待测样品溶液中克伦特罗和克伦特罗内标的定量离子色谱峰面积；C、以克伦特罗和克伦特罗内标的定量离子峰面积之比为纵坐标，以标准品溶液中克伦特罗浓度为横坐标制作样液中克伦特罗浓度标准曲线；D、根据待测样品提取液中克伦特罗和克伦特罗内标的定量离子峰面积，结合标准曲线，计算得到待测样品提取液中克伦特罗的浓度C，以此进行定量测定，以定性离子色谱峰面积与定量离子色谱峰面积比值在30～70％之间，进行定性确认；所述待测样品提取液中克伦特罗的浓度C的计算公式为：C=c×ci×A×Asicsi×Ai×As]]>其中C为待测样品提取液中克伦特罗的含量，单位为ng/mL；c为标准溶液中克伦特罗的浓度，单位为ng/mL；csi为标准溶液中克伦特罗内标的浓度，单位为ng/mL；ci待测样品提取液中克伦特罗内标的浓度，单位为ng/mL；A为待测样品提取液中克伦特罗定量离子的色谱峰面积；As为标准中克伦特罗定量离子的色谱峰面积；Asi为标准中克伦特罗内标的定量离子的色谱峰面积；Ai为待测样品提取液中克伦特罗内标的定量离子的色谱峰面积。