[发明专利]一种快速测定细胞培养上清液中多种化合物含量变化的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定细胞培养上清液中多种化合物含量变化的方法，步骤为：(1)选取不同时间点的细胞培养上清液，分别平行加入内标并进行前处理，得到不同时间点进样样品；(2)将所得进样样品采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，得到不同时间点的色谱图；(3)根据所得不同时间点的色谱图，绘制得到每种化合物在细胞培养过程中随时间的含量变化趋势图。本发明仅用一套仪器系统即可同时测定细胞培养上清液中多种化合物的含量变化，一个样品分析仅需17min，并且前处理方便，分析效率高、操作简单，适用性强，可用于不同细胞培养上清液中多种化合物的快速检测，包括微生物细胞、哺乳动物细胞等。

主权项

1.一种快速测定细胞培养上清液中多种化合物含量变化的方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)选取不同时间点的细胞培养上清液，分别平行加入2‑异丙基苹果酸作为内标，加入乙腈进行蛋白沉淀后，然后将所得溶液固液分离、稀释，得到不同时间点的细胞培养上清液进样样品；(2)将步骤(1)所得进样样品分别采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，完成多种化合物的分段扫描，得到不同时间点的色谱图；(3)将步骤(2)所得不同时间点的色谱图中的每个化合物峰面积结果导出，以时间为横坐标，以对应时间点时每种化合物与内标的峰面积比值为纵坐标，从而绘制得到每种化合物在细胞培养过程中随时间的含量变化趋势图；超高效液相色谱仪条件：色谱柱为反相色谱柱，流速为0.35mL/min，流动相A相为体积分数为0.1％甲酸的水溶液，B相为体积分数为0.1％甲酸的乙腈溶液，具体梯度洗脱程序如表1所示；表1梯度洗脱程序三重四极杆质谱仪条件：电喷雾电离，正负离子同时扫描，雾化气3.0mL/min，干燥气10mL/min，加热气10mL/min，离子源接口温度300℃，脱溶剂管温度250℃，加热模块温度400℃；所述的细胞包括微生物细胞和哺乳动物细胞；多种化合物包括糖类、氨基酸类、核苷酸类、维生素类以及其他细胞代谢物。