[发明专利]金黄色葡萄球菌四种AIPs信号分子同时进行检测的液质联用检测方法

摘要

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌四种AIPs信号分子同时进行检测的液质联用检测方法。其通过使用AIPs分子的标准工作液进行液相色谱和质谱参数的确立，建立了该液质联用检测方法并应用到检测金黄色葡萄球菌细菌发酵液中的AIPs分子，实现对金黄色葡萄球菌细菌群体中群体感应信号分子的检测，该液相色谱‑串联质谱联法实现了对四种AIPs分子进行快速准确的定量检测，其样品的前处理方法简便易操作，避免了二次污染，提高了检测的准确度，线性相关系数和最低检测限达到检测的要求，可以满足后续实验的需要，为食品安全监测建立了基础。

主权项

1.一种金黄色葡萄球菌四种AIPs信号分子同时进行检测的液质联用检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)标准工作液的配制a.按照1：1～1：1.5的体积比将乙腈溶液和含0.1～0.15％甲酸的水溶液均匀混合，作为溶剂用；b.分别准确称取一定量的四种AIPs分子标准品，放入同一容量瓶中并使用上述溶剂进行定容，使得溶液中各单质的质量浓度为10mg/mL，4℃避光贮存备用；在实验前按照梯度稀释的方法，用所述溶剂作为稀释液对存储液进行稀释，得到浓度分别为4.0mg/mL、2.0mg/mL、1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL的溶液作为标准工作液；(2)液质联用检测方法的建立使用步骤(1)所配置的标准工作液，进行液质联用检测方法的建立，根据得到的AIPs分子的色谱峰图，确定液相色谱和质谱条件如下：a.液相色谱条件：水相为含体积比0.1～0.2％甲酸的水溶液；有机相为含体积比0.1％～0.2％甲酸的乙腈溶液；色谱柱型号：SHIM‑PACK XR‑ODS 3.0mm×75mm,2.2μm；进样量：10～30μL；柱温：30℃；流速：0.3mL/min；采用梯度洗脱的方式；梯度洗脱程序为：0～10min，水相从80％变化到30％，10～11min，水相为30％，11～11.1min，水相从30％变化到80％，11.1～15min，水相为80％；b.质谱条件：在电喷雾电离正离子检测模式下(ESI+)，采用多反应监测的质谱扫描模式(MRM)；离子源温度为500℃；电喷雾电压为4400V；气帘气压力为10psi；雾化气压力为50psi；同时监测了四种目标物，其中四种AIPs信号分子的保留时间均在4.60min～6.60min之间；去簇电压在130～150V之间；射入电压在8～11V之间；碰撞电压在40～45V之间；碰撞室电压在18～20V之间。