[发明专利]一种GyV3新型环形病毒VP3融合蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201610889152.0 | 申请日： | 2016-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN106520809A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 叶建强;王萍;邵红霞;秦爱建;田晓彦;王伟康;万志敏 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K19/00 |
| 代理公司： | 扬州市锦江专利事务所32106 | 代理人： | 江平 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种GyV3新型环形病毒VP3融合蛋白的制备方法，涉及GyV3新型环形病毒的诊断用融合蛋白的制备技术领域。本发明设计了扩增出pGEX‑6p‑1线性化载体以及GyV3病毒VP3基因片段的两对引物，利用商品化的重组酶ExnaseTM II，不经酶切连接反应，直接在体外快速重组取得阳性克隆体，并转化BL21细菌，经IPTG诱导下即获得GyV3新型环形病毒VP3融合蛋白。本发明简化了克隆过程，实现VP3基因快速克隆表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 gyv3 新型 环形 病毒 vp3 融合 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种GyV3新型环形病毒VP3融合蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）以pGEX‑6p‑1质粒为模板，采用下述引物PCR扩增出pGEX‑6p‑1线性化表达载体；上游引物：5‘TAATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGC3’；下游引物：5‘CATGGGCCCCTGGAACAGAACTTCCAGAT3’；2）以人工合成的GyV3‑VP3 基因为模板，采用下述引物PCR扩增出VP3基因片段；上游引物：5‘GTTCCAGGGGCCCATGGAACCGGGACTTGG3’；下游引物：5‘GTTTTCACCGTCATTACAGTCTTAGCCTTT3’；3）在重组酶ExnaseTM II的作用下，将所述pGEX‑6p‑1线性化表达载体和VP3基因片段进行重组克隆，取得阳性克隆体，并转化BL21细菌，经IPTG诱导下即获得GyV3新型环形病毒VP3融合蛋白。
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