[发明专利]基于多元技术的贝类血淋巴细胞分类方法

摘要

本发明涉及一种基于多元技术的贝类血淋巴细胞分类方法，包括如下步骤血淋巴采集和总血球计数、细胞光学显微镜分析、流式细胞术、透射电镜技术、扫描电镜技术、统计分析。本发明是在现在技术的基础上，克服不足，提供一种贝类血淋巴细胞的分类方法，避免了由于贝类种间的差异性和研究方法的不同，造成贝类血淋巴细胞分类上的复杂化，难以获得统一标准的现象，对于贝类血淋巴细胞的分类及它们在机体免疫过程中所起的作用等研究方面具有重要的意义。

主权项

基于多元技术的贝类血淋巴细胞分类方法，所述方法包括以下步骤：步骤S1：血淋巴采集和总血球计数的步骤；采用注射器从贝类闭壳肌处抽取血淋巴，将收集的血淋巴液储存于冰中以减少细胞自发性凝集，然后使用MultisizerTM3库尔特颗粒计数仪进行测定，以确定血淋巴中细胞的浓度和大小分布频率；步骤S2：细胞光学显微镜分析的步骤；将步骤S1种抽取的血淋巴进行染色处理，经玻片用中性树胶封片剂封片，然后置于光学显微镜下观察；步骤S3：流式细胞术分析的步骤；从血淋巴液中新鲜采集的血淋巴细胞通过BD FACSCALIBUR流式细胞分析仪分析；步骤S4：透射电镜技术分析的步骤；将血淋巴细胞进行处理配制成颗粒物，并把颗粒物处理配制成切片，经透射电子显微镜检查切片；步骤S5：扫描电镜技术分析的步骤；将血淋巴液滴加在载玻片上让细胞粘附，并把粘附的细胞进行冲洗、固定、脱水、干燥处理；步骤S6：统计分析的步骤；进行数据分析之前，所有数据使用SPSS 16.0进行Shapiro‑Wilk's检验检查正态分布性，用Levene's检验检查方差齐性，百分比数据在分析前进行反正弦转换。