[发明专利]一种零背景的平末端克隆载体pRI857及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种零背景的平末端克隆载体pRI857构建及其在基因克隆和基因文库构建中的应用，属于生物技术领域。所述的质粒pRI857含有Plac启动子，cI857阻遏基因，噬菌体PR启动子，KanR抗性标记，dbl终止子和ColE1复制子基因元件。平末端克隆载体pRI857通过cI857阻遏基因控制PR启动子下游基因KanR的转录，37℃时克隆载体pRI857可进行复制，30℃时，pRI857对重组质粒进行筛选，通过这一技术进行分子克隆，可以获得100％的阳性克隆。此外，该克隆载体也可用于基因组文库的高效构建，同时能有效避免空载体干扰，是后基因组时代高通量基因筛选与功能验证的一种有效工具。

主权项

一种零背景的平末端克隆载体pRI857，其特征在于，为利用PCR扩增重组质粒pUC‑cI857中的Plac‑cI857基因和重组质粒pBBR1MCS‑PR中的PR‑KanR基因替换质粒pKV6中的AmpR和ermB‑ermA基因，PR‑KanR基因，Plac‑cI857基因与质粒pKV6中的dbl‑colE1基因顺序连接形成全长序列为SEQ ID NO.17的重组质粒；所述的重组质粒pBBR1MCS‑PR，为利用PCR扩增质粒pCP20中的PR启动子基因替换pBBR1MCS‑2质粒中的KanR的启动子序列，形成全长序列为SEQ ID NO.15的重组质粒；所述的重组质粒pUC‑cI857，为利用PCR扩增质粒pCP20中的cI857基因替换pUC19中的LacZa基因，形成全长序列为SEQ ID NO.16的重组质粒所述的cI857开放阅读框上设计有BfrBI平末端酶切位点。