[发明专利]一种快速测定乳酸菌胁迫菌株存活率的方法

摘要

本发明提供了一种全新的通过液体培养测定乳酸菌胁迫菌株存活率的方法，属于乳酸菌胁迫菌株存活率测定方法的技术领域，主要包括步骤：通过OD₆₀₀计算取样时间点的生物量比值；以不同标准胁迫时间制备的标准胁迫组取样时间点的生物量比值为横坐标，相对应胁迫时间的菌株存活率为纵坐标，绘制线性标准曲线，得到胁迫标准方程；验证胁迫标准方程是否有效；若胁迫标准方程有效，将取样时间点的生物量比值代入所述胁迫标准方程，得到待测胁迫条件下的菌株存活率；本发明方法操作简单，测定结果与稀释平板菌落计数法的线性相关良好，检测时间和检测工作量大幅度降低，实验误差较小，有利于实现乳酸菌胁迫菌株存活率的快速准确检测。

主权项

1.一种快速测定乳酸菌胁迫菌株存活率的方法，其特征在于：所述快速测定乳酸菌胁迫菌株存活率的方法包括步骤：制备至少5组经过不同时间盐酸溶液胁迫后的胁迫菌悬液和未经过胁迫的对照菌悬液；采用传统稀释平板计数法测定所述菌悬液的菌株存活率并通过OD₆₀₀计算所述菌悬液取样时间点的生物量比值；以不同盐酸溶液胁迫时间制备的标准胁迫菌悬液的取样时间点的生物量比值为横坐标，相对应胁迫时间的菌株存活率为纵坐标，绘制线性标准曲线，得到胁迫标准方程；首次测定某胁迫菌株存活率，须选择至少两个不同胁迫时间处理的菌悬液，通过OD₆₀₀计算每个胁迫时间的取样时间点的生物量比值，并将该取样时间点的生物量比值代入该胁迫标准方程，得到该胁迫下拟合的菌株存活率值，并与传统稀释平板计数法方法对比，若误差率均小于10％，所述胁迫标准方程适用于该胁迫菌株存活率的测定，计算待测胁迫任意条件的取样时间点的生物量比值，代入所述胁迫标准方程，得到待测胁迫条件下的菌株存活率；其中，所述取样时间点的生物量比值的计算方法为：取经过胁迫的乳酸菌菌悬液和未经胁迫的菌悬液，接种至MRS培养基中，得到胁迫组和对照组，静置培养，在所述胁迫组和对照组到达稳定期之前，间隔测定胁迫组和对照组乳酸菌发酵液的OD₆₀₀，得到胁迫组OD₆₀₀变化曲线和对照组OD₆₀₀变化曲线；根据公式：生物量比值＝酸胁迫组OD₆₀₀/对照组OD₆₀₀，计算乳酸菌的生物量比值；得到不同培养时间的生物量比的变化曲线，以生物量比变化曲线最低点后第一个测定时间点作为取样时间点，并得到取样时间点的生物量比值；其中，所述传统稀释平板计数法测定酸胁迫菌株存活率的方法为：梯度稀释经酸胁迫且重悬于等量生理盐水的菌悬液，吸取稀释菌液在MRS固体培养基上点样，待表层菌液被吸收后，倒置培养至菌落长出，对菌落计数，同时以未经过酸胁迫处理的菌悬液作为对照，计算菌株存活率；菌株存活率＝胁迫后的菌落数/对照菌落数。