[发明专利]无核葡萄胚挽救畸形苗试管微嫁接方法

摘要

本发明公开了一种无核葡萄胚挽救畸形苗试管微嫁接方法，包括砧木准备、接穗选择、嫁接、嫁接体再培养和嫁接苗移栽。本发明通过对无核葡萄胚挽救畸形苗的微嫁接技术完善了无核葡萄胚挽救技术体系，提高了无核葡萄育种效率，为葡萄试管苗嫁接相关理论研究提供新的科学研究基础。本发明嫁接操作简单，移栽田间后无需去除砧木上的侧芽，省工省时，无论是作为砧木还是接穗的胚挽救苗，达到幼苗标准即可直接用于嫁接，无需再继代，节约时间。

主权项

无核葡萄胚挽救畸形苗试管微嫁接方法，包括如下步骤：（1）砧木准备：在最佳取样期选取无核葡萄品种的种子无菌接种在固体胚培养培养基上，暗培养9~10周后，将发育胚无菌接种于胚萌发培养基上，1周后转为光培养，苗龄2~3周后，两片子叶平展且具一片真叶时即可用于做砧木嫁接，培养室条件为：温度控制在23 ± 1 °C，相对湿度 65% ± 5 %，光照强度 200 ± 50 μmol·m‑2s‑1，每天 16 h；（2）接穗选择：在最佳取样期选取无核葡萄品种的种子无菌接种在固体胚培养培养基上，暗培养9~10周后，将发育胚无菌接种于胚萌发培养基上，1周后转为光培养，苗龄2~3周后，选择无核葡萄胚挽救畸形苗为接穗，培养室条件为：温度控制在23 ± 1 °C，相对湿度 65% ± 5 %，光照强度 200 ± 50 μmol·m‑2s‑1，每天 16 h；(3) 嫁接：将步骤（1）准备的砧木子叶及其以上部分切去，并将其下胚轴中间纵切形成切口，将步骤（2）准备的接穗下端斜切出“V”形伤口，将接穗插于砧木切口，使砧木和接穗的形成层紧密接触，用parafilm封口膜紧裹接口；（4）嫁接体再培养：将步骤（3）得到的嫁接苗无菌接种于生根培养基中，置于组培室中进行再培养，培养室条件为：温度控制在25 ± 1 °C，相对湿度 70% ± 5 %，光照强度 400 ± 50 μmol·m‑2s‑1，每天 16 h；（5）嫁接苗移栽：当嫁接体苗龄3~4周，将成活的嫁接苗于驯化室驯化后，移栽于育苗基质中培养至具4~6片真叶移栽到大田，按常规栽培方式管理。