[发明专利]一种从金针菇中制备亚硝酸盐还原酶的方法在审
| 申请号： | 201610895015.8 | 申请日： | 2016-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN106467907A | 公开（公告）日： | 2017-03-01 |
| 发明（设计）人： | 杨文建;王凡;杜恒君;胡秋辉;裴斐;马宁 | 申请（专利权）人： | 南京财经大学 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210023 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从金针菇中制备亚硝酸盐还原酶的方法，属于食品酶生物技术领域。制备步骤如下将新鲜金针菇洗净、沥干、冻干后低温粉碎，菇粉过60‑100目筛，超声波辅助溶壁酶法提取，盐析，透析脱盐后浓缩得到粗酶液。用DEAE‑Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶G‑150层析柱分离纯化，收集具有酶活性的蛋白质，经透析，PEG20000包埋浓缩，冻干即得亚硝酸盐还原酶。本发明为亚硝酸盐还原酶的制备提供新思路，可应用于酱菜、腌肉、研制咸菜等发酵食品领域来降低产品中亚硝酸盐的含量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 金针菇 制备 亚硝酸盐 还原酶 方法 | ||
【主权项】：
一种从金针菇中制备亚硝酸盐还原酶的方法，其特征在于：提取步骤如下：(1)清洗冻干：将金针菇用流水或清洗机彻底洗净，沥干，切分，放入‑20～‑18℃条件下预冻12h后，放入真空冷冻干燥机处理36‑48h，冻干样品4℃粉碎后过60‑100目筛获得金针菇粉，置于‑20℃条件下备用；(2)超声波辅助酶法提取：将金针菇粉按料液比1∶25～30加入蒸馏水，经超声波处理后，加入溶壁酶酶解，调pH为中性，8000r/min离心15min，收集上清液，加入硫酸铵盐析，4℃静置2h，5000r/min离心20min，取沉淀，14kDa透析袋脱盐后得到粗酶液，置于4℃保存备用；(3)酶分离纯化：粗酶液经0.45μm微孔滤膜过滤后，用DEAE‑Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶G‑150层析柱分离纯化，收集具有亚硝酸盐还原酶活性的酶液，经透析，PEG20000包埋，浓缩，冻干即得亚硝酸盐还原酶。
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