[发明专利]一种甘蔗叶片中茉莉酸含量的HPLC检测方法

摘要

本发明公开了一种甘蔗叶片中茉莉酸含量的HPLC检测方法，包括以下步骤：S1.将待测的甘蔗叶片分离出茉莉酸；S2.茉莉酸甲酯化；S3.采用HPLC进行检测。本发明尤其适用于感染梢腐病的甘蔗叶片中茉莉酸含量的测定，能有效排除梢腐病病原菌对检测结果的干扰，为判断甘蔗品种对梢腐病感抗差异研究提供技术支持，从而为甘蔗抗梢腐病育种和茉莉酸介导甘蔗梢腐病病原菌胁迫应答生化机制提供科学有力的技术保证。

主权项

1.一种甘蔗叶片中茉莉酸含量HPLC 检测方法的应用，其特征在于：甘蔗叶片中茉莉酸含量HPLC 检测方法在判断甘蔗品种对梢腐病感性和抗性差异方面的应用，所述HPLC 检测方法包括以下步骤：S1.将丙酮和50mmol/L柠檬酸水溶液按体积比7:3混合制得提取溶剂，冷却至4℃，在待测的甘蔗叶片中加入预冷的提取溶剂，再加入液氮，研磨成浆，加入乙酸乙酯，混匀，超声提取30min，离心，取上清液，残渣中加入预冷的提取溶剂，超声提取30min，离心后取上清液，合并上清液，上清液中加入吸附剂石墨化碳黑和PSA硅胶吸附剂，振荡5min，离心，取上清液，用氮气吹干水分，获得叶片中的茉莉酸；S2.将步骤S1中获得的茉莉酸，加入甲酯化试剂，所述甲酯化试剂为乙醚和甲醇混合溶液与三甲基硅烷化重氮甲烷的正己烷溶液，所述乙醚和甲醇混合溶液由乙醚与甲醇按体积比9:1混合均匀，三甲基硅烷化重氮甲烷的正己烷溶液的浓度为2mmol/L，乙醚与甲醇混合溶液与三甲基硅烷化重氮甲烷的正己烷溶液的体积比为25:1，茉莉酸和甲酯化试剂混匀，25℃下放置30min进行甲酯化反应，然后加入冰乙酸的正己烷溶液，冰乙酸的浓度为2mmol/L，冰乙酸的正己烷溶液与三甲基硅烷化重氮甲烷的正己烷溶液的体积比为1:1，混匀，放置30min，终止反应，用氮气吹干水分，定容，定容采用的溶解试剂为体积分数为0.1%甲酸水溶液与甲醇按3:1的体积比混合制得，采用0.22μm的水相滤膜过滤，作为样品溶液备用；S3.采用HPLC检测样品溶液中茉莉酸的含量：HPLC色谱条件为：流动相由甲醇、超纯水和乙酸按体积比200:300:3混合制成，柱温为35℃，流速1ml/min，进样量 10 μL，紫外检测波长 230nm。