[发明专利]一种食用植物油中阿维菌素含量的高效液相色谱检测方法

摘要

本发明公开了一种食用植物油中阿维菌素含量的高效液相色谱分析方法，其将样品经甲醇涡旋震荡提取后，用ODS C18固相萃取柱净化，以N‑甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化，最后以液相色谱‑荧光法进行测定。本方法采用的试剂较少，节约成本；样品前处理方法简单，净化效果好，减少了仪器在使用过程中的维护，解决了使用液相色谱‑紫外检测器时灵敏度太低，基质干扰较严重的技术问题；测定的结果准确、重复性好，检测的特异性和灵敏度高，为食用植物油中阿维菌素含量的检测提供了参考。

主权项

一种食用植物油中阿维菌素含量的高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)准备标准工作溶液：称取0.0200～0.0300g阿维菌素标准品于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，然后用乙腈稀释并最终配制成5个具有浓度梯度的标准工作溶液；(2)提取样品：称取2.00～5.00g食用植物油样品于50mL具塞离心管中，加入10～15mL甲醇涡旋震荡提取2～3min后，于高速离心机中以4000～6000r/min离心8～10min，取出上清液于50mL梨形瓶中，再加入10～15mL甲醇涡旋震荡提取1～2min后，于高速离心机中以4000～6000r/min离心5～8min，取出上清液，合并于50mL梨形瓶中，45℃水浴旋转蒸发后，得到净化的样品溶液；(3)净化样品：用8～10mL甲醇活化ODS C18固相萃取柱，用9～12mL甲醇分三次加入步骤(2)所述的50mL梨形瓶中，涡旋后将样品转入固相萃取柱中，再用8～10mL甲醇淋洗，收集淋洗液于50mL梨形瓶中，45℃水浴旋转蒸发后，氮气吹干，2mL乙腈定容，从中取出1mL于10mL具塞玻璃刻度试管中，得到待衍生化的样品溶液；(4)样品衍生化：在避光、室温环境下，于步骤(3)制备的待衍生化的样品中依次加入0.3～0.5mL N‑甲基咪唑和0.3～0.5mL三氟乙酸酐，黑暗处衍生化30～40min后，往试管中再加1～1.5mL甲醇，黑暗处醇化30～40min后，通过0.45μm滤膜过滤，得到待检测阿维菌素含量的样品溶液；(5)准备基质配标工作溶液：对空白食用植物油样品按上述步骤(2)和步骤(3)的前处理方式提取和净化后，于氮气吹干的梨形瓶中加入2mL步骤(1)制备的梯度浓度的阿维菌素标准工作溶液定容，从中取出1mL于10mL具塞玻璃刻度试管中，采用步骤(4)的方法对样品进行衍生化，得到梯度浓度的阿维菌素的基质配标工作溶液；(6)将步骤(5)制备的梯度浓度的阿维菌素的基质配标工作溶液和步骤(4)制备的待检测阿维菌素含量的样品溶液注入液相色谱仪，经测试分析得到食用植物油样品中阿维菌素的含量；在液相色谱仪测定时，采用的色谱条件为：色谱柱：Eclipse XDBC18，其中色谱柱的规格为5μm，4.6×150mm；柱温：25℃；流速:1mL/min；进样量：20μL；流动相：甲醇/水的体积比为94/6；激发波长：365nm，发射波长：470nm。