[发明专利]一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法

摘要

本发明公开了一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法，其将样品经甲醇涡旋震荡提取后，用Envi‑18固相萃取柱净化，部分样品直接用气相色谱仪来分析甲草胺和腐霉利的含量，而剩余样品以N‑甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化，用液相色谱‑荧光法测定阿维菌素的含量。本方法采用的试剂较少，能有效提取食用植物油中的阿维菌素、甲草胺和腐霉利，节约成本；样品前处理方法简单，提供了更干净的上机溶液，减少了仪器在使用过程中的维护；测定的结果准确、重复性好，检测的特异性和灵敏度高，为食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利含量的同时检测提供了参考。

主权项

1.一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)准备标准工作溶液：分别称取0.0500～0.0600g阿维菌素标准品，0.0400～0.0500g甲草胺和0.0400～0.0500g腐霉利于三个100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，然后用乙腈稀释并最终配制成具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的混合标准工作溶液；(2)提取样品：称取5.00g食用植物油样品于50mL具塞离心管中，加入15mL甲醇涡旋震荡提取2min后，于高速离心机中以6000r/min离心10min，取出上清液于50mL梨形瓶中，再加入10mL甲醇涡旋震荡提取1min后，于高速离心机中以6000r/min离心6min，取出上清液，合并于50mL梨形瓶中，45℃水浴旋转蒸发后，得到待净化的样品；(3)净化样品：用10mL甲醇活化Envi‑18固相萃取柱，用12mL甲醇分三次加入步骤(2)所述的50mL梨形瓶中，涡旋后将样品转入固相萃取柱中，再用10mL甲醇淋洗，收集淋洗液于50mL梨形瓶中，45℃水浴旋转蒸发后，氮气吹干，2mL乙腈定容，从中取出1mL于10mL具塞玻璃刻度试管中，得到待衍生化的样品；剩余的样品溶液通过0.45μm滤膜过滤，得到待检测甲草胺与腐霉利两种农药含量的样品溶液；(4)样品衍生化：在避光、室温环境下，将步骤(3)制备的待衍生化的样品依次加入0.3mL N‑甲基咪唑和0.3mL三氟乙酸酐，黑暗处衍生化40min后，往试管中再加1mL甲醇，黑暗处醇化40min后，过0.45μm滤膜，得到待检测阿维菌素含量的样品溶液；(5)准备基质配标工作溶液：对空白食用植物油样品按步骤(2)和步骤(3)提取和净化后，于氮气吹干的梨形瓶中加入2mL步骤(1)制备的具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的混合标准工作溶液，涡旋震荡后，从中取出1mL于10mL具塞玻璃刻度试管中，按步骤(4)的方法进行衍生化，得到具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的基质配标工作溶液；(6)步骤(1)制备的具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的标准工作溶液和步骤(3)制备的待检测甲草胺与腐霉利两种农药含量的样品溶液注入气相色谱仪，经测试分析得到食用植物油样品中甲草胺和腐霉利的含量；将步骤(5)制备的具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的基质配标工作溶液和步骤(4)制备的待检测阿维菌素含量的样品溶液注入液相色谱仪，经测试分析得到食用植物油样品中阿维菌素的含量；步骤(6)所述的气相色谱仪的测试条件为：色谱柱：HP‑5，其中色谱柱的规格为30m×0.2mm×0.33μm；进样口温度：260℃；进样模式：不分流；进样量：2μL；检测器温度：290℃；柱初始温度为80℃，以20℃/min速率升温至200℃，然后以5℃/min速率升温至250℃，再以10℃/min速率升温至280℃，保持5min；步骤(6)所述的液相色谱仪的测试条件为：色谱柱：Eclipse XDBC18，其中色谱柱的规格为5μm，4.6×150mm；柱温：25℃；流速:1mL/min；进样量：20μL；流动相：甲醇/水的体积比为94/6；激发波长：365nm，发射波长：470nm；步骤(1)、(5)或者(6)中所述的具有浓度梯度的阿维菌素、甲草胺和腐霉利三种农药的混合标准工作溶液的配制方法如下：(1)准确称取0.0512g阿维菌素于100mL容量瓶中，用乙腈溶解，并准确定容至100mL，得到476.16μg/mL的阿维菌素标准储备液；(2)准确称取0.0431g甲草胺于100mL容量瓶中，用乙腈溶解，并准确定容至100mL，得到420.225μg/mL的甲草胺标准储备液；(3)准确称取0.0433g腐霉利于100mL容量瓶中，用乙腈溶解，并准确定容至100mL，得到430.835μg/mL的腐霉利标准储备液；(4)分别取5mL步骤(1)制备的阿维菌素标准储备液、5mL步骤(2)制备的甲草胺标准储备液和5mL步骤(3)制备的腐霉利标准储备液于50mL容量瓶中，用乙腈准确定容至50mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为47.616μg/mL、42.0225μg/mL、43.0835μg/mL的标准储备液；(5)分别取2mL步骤(1)制备的阿维菌素标准储备液、2mL步骤(2)制备的甲草胺标准储备液和2mL步骤(3)制备的腐霉利标准储备液于100mL容量瓶中，用乙腈准确定容至100mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为9.5232μg/mL、8.4045μg/mL、8.6167μg/mL的标准储备液；(6)取步骤(4)制备的标准储备液5mL于100mL容量瓶中，用乙腈准确定容至100mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为2.3808μg/mL、2.101125μg/mL、2.154175μg/mL的标准储备液；(7)取步骤(4)制备的标准储备液2mL于100mL容量瓶中，用乙腈准确定容至100mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为0.95232μg/mL、0.84045μg/mL、0.86167μg/mL的标准储备液；(8)取步骤(5)制备的标准储备液5mL于100mL容量瓶中，用乙腈准确定容至100mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为0.47616μg/mL、0.420225μg/mL、0.430835μg/mL的标准储备液；(9)取步骤(6)制备的标准储备液5mL于50mL容量瓶中，用乙腈准确定容至50mL，得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为0.23808μg/mL、0.2101125μg/mL、0.2154175μg/mL的标准储备液；(10)取步骤(6)制备的标准储备液5mL于100mL容量瓶中，用乙腈准确定容至100mL得到阿维菌素、甲草胺、腐霉利的浓度依次为0.11904μg/mL、0.10505625μg/mL、0.10770875μg/mL的标准储备液。