[发明专利]一种单克隆抗体的纯化方法有效
| 申请号： | 201610901017.3 | 申请日： | 2016-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN106380519B | 公开（公告）日： | 2019-11-01 |
| 发明（设计）人： | 李乐;郭秋菊;蒙国基;邓义熹;张铭生;李雪;于玉根 | 申请（专利权）人： | 深圳万乐药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;C07K1/22;C07K1/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518118 广东省深圳市坪山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高效去除重组人源化抗HER2单克隆抗体曲妥珠单抗中酸性异构体的方法，该方法利用阳离子交换层析填料对含有酸性异构体的抗体样品进行纯化，酸性异构体含量降至25%以下，抗体回收率达到60%以上，本发明的方法采用缓冲液种类少，且为等梯度洗脱，操作方便，适合工业化放大生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 单克隆抗体 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种去除重组人源化抗HER2单克隆抗体曲妥珠单抗中酸性异构体的方法，其特征在于包含如下步骤：步骤1)：用平衡缓冲液将阳离子交换层析填料平衡，所述阳离子交换填料选自POROS XS，平衡缓冲液为NaAc‑HAc缓冲液，平衡缓冲液pH5.0～5.5，电导率为3.0～5.0mS/cm；步骤2)：将包含抗体及其酸性异构体的样品加载到阳离子交换层析填料上，样品pH为5.0～5.5，每毫升阳离子交换层析填料加载的抗体样品量为50～100mg，保留时间为3～6min；步骤3)：用步骤1)所述平衡缓冲液清洗所述阳离子交换填料，清洗3～5个柱体积；步骤4)：用清洗缓冲液清洗所述阳离子交换填料，清洗3～8个柱体积，所述清洗缓冲液种类选自Tris、HEPES、MOPS、NaPi，所述清洗缓冲液浓度为10～50mM，pH为7.5～8.3，电导率为1.0～7.0mS/cm；步骤5)：用步骤1)所述平衡缓冲液清洗所述阳离子交换层析填料，清洗4～5个柱体积；步骤6)：用洗脱缓冲液从所述阳离子交换填料上洗脱抗体，自UV280为500mAU开始收集，收集UV280上升及再次降至500mAU时的抗体，所述洗脱缓冲液与平衡缓冲液缓冲体系一致，pH为5.0～5.5，电导率为16.0～22.0mS/cm。
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