[发明专利]一种添加过氧化氢胁迫节杆菌发酵产过氧化氢酶的方法

摘要

本发明一种添加过氧化氢胁迫节杆菌发酵产过氧化氢酶的方法，属于微生物发酵产酶技术领域。本发明是以一株高产过氧化氢酶的Arthrobacter sp. LHM 7719为生产菌株，经种子培养和在产酶培养基中添加0.4%(v/v)～0.9%(v/v)过氧化氢作为诱导剂后，胁迫菌体产生过氧化氢酶，经过深层发酵，可明显提高过氧化氢酶的活力达1.15倍左右。在7L发酵罐中过氧化氢酶产量从未加过氧化氢胁迫前的45100U/mL提高到51870U/mL，相当于增加过氧化氢酶产量15%左右，且适用于工业化，所生产的过氧化氢酶可用于纺织印染行业、食品工业、工业废水处理、造纸等领域。

主权项

一种添加过氧化氢胁迫节杆菌发酵产过氧化氢酶的方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）种子培养基：从斜面上挑取单菌落，划线于LB平板培养基，将平板倒置于30℃培养箱中培养24小时，再从平板上刮取一环菌种，接种到含有50mL种子培养基的250mL三角瓶中进行培养，培养条件：pH 7.2，培养时间16小时，温度30℃，摇床转速为160r/min，即发酵种子液；（2）发酵产酶：以体积比3.5%的接种量将培养好的种子液接种到含5L产酶培养基的7L发酵罐进行发酵产酶；发酵条件：pH为7.0～8.0，培养温度为30～40℃，发酵时间为35～55小时，转速350～500r/min，通气量1.2L/min～1.7L/min；发酵过程中过氧化氢的添加方式为：在发酵开始后18小时，22小时，26小时，30小时，34小时，38小时分批添加培养基中，使培养基中的过氧化氢的体积浓度为0.4%～0.6%；42小时至52小时恒速流加过氧化氢，使得这一段时间培养基中过氧化氢的体积浓度维持在0.6%～0.9%区间的某一定值处；（3）过氧化氢酶提取：取2.5L发酵液，10000 转/分钟离心30分钟，获得菌泥，采用高压进行细胞破碎，破碎机压力控制在2000bar以上，加入磷酸缓冲液2.5L混匀后，10000 转/分钟离心30分钟，取上清液得到碱性过氧化氢酶。