[发明专利]肝癌检测引物探针及其试剂盒在审
申请号: | 201610902482.9 | 申请日: | 2016-10-17 |
公开(公告)号: | CN106434937A | 公开(公告)日: | 2017-02-22 |
发明(设计)人: | 王明;赵会 | 申请(专利权)人: | 上海赛安生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙)31258 | 代理人: | 任益 |
地址: | 200436 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及一种肝癌检测引物探针及其试剂盒,试剂盒包括用于配制数字PCR反应液的数字PCR预混液、液滴稳定剂和miRNAs引物探针混合液,以及用于进行RNA逆转录的茎环逆转录引物混合液;miRNAs引物探针混合液中包括用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的上游引物和探针,以及用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122、hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的通用下游引物;茎环逆转录引物混合液中包括分别用于逆转录hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的茎环逆转录引物;hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a是标志物,hsa‑miR‑1228是内参。本发明的肝癌检测试剂盒可以快速、便捷、准确地检测作为肝癌早期诊断标志物的miRNA的表达水平。 | ||
搜索关键词: | 肝癌 检测 引物 探针 及其 试剂盒 | ||
【主权项】:
一种肝癌检测引物探针,其特征在于:包括用于逆转录hsa‑mir‑21的茎环逆转录引物a,用于逆转录hsa‑mir‑122的茎环逆转录引物b,用于逆转录hsa‑miR‑199a的茎环逆转录引物c,用于逆转录hsa‑miR‑1228的茎环逆转录引物d,用于检测hsa‑mir‑21的上游引物a和探针a,用于检测hsa‑mir‑122的上游引物b和探针b,用于检测hsa‑miR‑199a的上游引物c和探针c,用于检测hsa‑miR‑1228的上游引物d和探针d,以及用于检测hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122、hsa‑miR‑199a和hsa‑miR‑1228的通用下游引物;所述hsa‑mir‑21、hsa‑mir‑122和hsa‑miR‑199a是标志物,所述hsa‑miR‑1228是内参;所述上游引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,所述探针a的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示;所述上游引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示,所述探针b的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示;所述上游引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示,所述探针c的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示;所述上游引物d的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示,所述探针d的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示;所述通用下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示;所述茎环逆转录引物a的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示,所述茎环逆转录引物b的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示,所述茎环逆转录引物c的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示,所述茎环逆转录引物d的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示;所述探针a和探针b的5’端设有一种荧光报告基团,所述探针c和探针d的5’端设有另一种荧光报告基团,所述探针a、探针b、探针c和探针d的3’端设有淬灭荧光基团;所述各上游引物在反应体系中的终浓度为0.1μM/L~1.5μM/L,所述通用下游引物在反应体系中的终浓度为2μM/L~4μM/L;所述探针a在反应体系中的终浓度为0.19μM/L~0.5μM/L,所述探针b在反应体系中的终浓度为0.1μM/L~0.18μM/L,所述探针c在反应体系中的终浓度为0.18μM/L~0.5μM/L,所述探针d在反应体系中的终浓度为0.1μM/L~0.17μM/L。
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