[发明专利]高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因的方法有效
| 申请号： | 201610905578.0 | 申请日： | 2016-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN106497979B | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 刘马峰;张利;王梦怡;程安春;汪铭书;贾仁勇;朱德康;陈舜;孙昆峰;杨乔;吴英 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 611100 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因的方法，具体方法是将由待缺基因上游片段、抗性基因片段和待缺基因下游片段组成的融合片段通过自然转移转入鸭疫里默氏杆菌，然后用所述抗性基因的抗生素筛选即获得缺失基因的鸭疫里默氏杆菌，该方法简单，将缺失基因构建融合片段后可以直接与宿主菌发生自然交换，并且培养周期短，转化率高，能够高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因，为鸭疫里默氏杆菌基因功能及减毒疫苗研制提供了工具。 | ||
| 搜索关键词： | 高效 缺失 鸭疫里默氏 杆菌 基因 方法 | ||
【主权项】：
1.高效缺失鸭疫里默氏杆菌基因的方法，其特征在于：将由待缺基因上游片段、抗性基因片段和待缺基因下游片段组成的融合片段通过自然转移转入鸭疫里默氏杆菌，然后用所述抗性基因的抗生素筛选即获得缺失基因的鸭疫里默氏杆菌；所述待缺基因为鸭疫里默氏杆菌基因；所述抗性基因为红霉素抗性基因；所述融合片段由以下方法制备：以鸭疫里默氏杆菌为模板，分别以SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3与SEQ ID NO.4为引物进行PCR扩增，扩增分别获得基因上游片段和基因下游片段；然后以红霉素抗性的质粒pEP4351为模板，以SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6为引物进行PCR扩增，扩增获得红霉素抗性基因；再将获得的基因上游片段、基因下游片段和红霉素抗性基因进行混合并以此为模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4为引物进行PCR扩增，即获得融合片段；所述自然转移的方法如下：向含有MgCl2的活化的鸭疫里默氏杆菌菌液中加入融合片段，然后密封并置于37℃条件下孵育30分钟，再加入含有MgCl2的GCB培养基，于37℃条件下孵育7小时即可；所述鸭疫里默氏杆菌为RA ATCC11845。
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