[发明专利]一种去除总RNA样品中核糖体核酸rRNA的方法和组合物

摘要

本发明涉及用于一种去除总RNA样品中核糖体核酸rRNA的方法、组合物和试剂盒。

主权项

1.一种去除总RNA样品中人类核糖体核酸rRNA的方法，所述方法包含:a)提供包含衍生自一种真核生物体或者物种的RNA分子的初始样本，其中所述RNA分子包含rRNA分子和非rRNA的RNA分子；b)针对真核生物体或者物种的rRNA的全长序列每50bp设计一个与rRNA序列反向互补配对的DNA探针，获得DNA探针的组合物，其中，所述DNA探针的组合物由序列SEQ ID NO:1‑185所示的DNA探针组成；c)在一定条件下使所述初始样本接触所述DNA探针的组合物，以便至少部分所述DNA探针和rRNA分子杂交形成DNA:RNA杂交双链，获得处理后的样本；d)在一定条件下使所述处理后的样本接触RNase H酶，特异性消化所述DNA：RNA杂交双链，从而生成rRNA除尽的样本，其中所述rRNA除尽的样本包含存在于所述初始样本中的所述非rRNA的RNA分子的至少部分，并且除尽了样本中的99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％的rRNA分子；e)在一定条件下使所述rRNA除尽的样本接触DNase混合酶去除样品中痕量DNA和/或降解剩余DNA探针混合物，终止反应；f)纯化；其中，步骤c)所述DNA探针和rRNA分子杂交形成DNA:RNA杂交双链的方法为，将初始样本与DNA探针混合，加入Tris‑Hcl和KCl组成的pH7.5的反应试剂和无RNA酶灭菌水，将上述混合溶液在PCR仪器上进行杂交反应；初始样本中总RNA与DNA探针的用量比例为1:1；其中，步骤e)中DNase混合酶为DNaseI和Exonuclease I以等比例混合而成，以及，所述真核生物体或者物种是人类。