[发明专利]细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母有效
| 申请号： | 201610912165.5 | 申请日： | 2016-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN106497963B | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 王泽方;杨海涛;陈卓芝;程莹莹;王雪;童善惟;侯宇佳 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;A62D3/02;C12R1/84;A62D101/28 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母，构建为：(1)从毕赤酵母基因组中克隆出锚定蛋白基因；化学合成疏水蛋白基因和PETase基因；(2)锚定蛋白基因和PETase基因连接得融合序列1；锚定蛋白基因和疏水蛋白基因连接得融合序列2；(3)将融合序列1连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体1；将融合序列2连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体2；(4)融合表达载体1、2转入表达宿主毕赤酵母中，得到本发明的重组毕赤酵母。本发明使酶固着定位于细胞表面。与游离酶相比具有稳定性高、易回收、反复使用、成本低，疏水蛋白与PETase在毕赤酵母中共展示增强重组毕赤酵母的稳定性。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 表面 展示 pet 分解 疏水 蛋白 重组 酵母 | ||
【主权项】：
1.细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母的构建方法，其特征包括如下步骤：(1)从毕赤酵母GS115基因组中克隆出锚定蛋白基因；化学合成疏水蛋白基因和如SEQ ID NO.1所示的PETase基因；(2)利用PCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和SEQ ID NO.1的核苷酸序列连接得到融合序列1；利用PCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和疏水蛋白基因连接得到融合序列2；(3)将融合序列1连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体1；将融合序列2连接到毕赤酵母表达载体上，得到融合表达载体2；(4)将融合表达载体1和融合表达载体2转入表达宿主毕赤酵母中，得到细胞表面共展示PET分解酶和疏水蛋白的重组毕赤酵母；所述锚定蛋白基因为核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的GCW51、核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的GCW61或核苷酸序列如SEQ ID No.8所示的GCW21；所述疏水蛋白基因为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的HGF1基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的HFB1基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的SC3基因或核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的HFB2基因。
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