[发明专利]细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌及构建及应用有效
| 申请号： | 201610912533.6 | 申请日： | 2016-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN106636158B | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 王泽方;杨海涛;王遨;王时超;董国修;何春霖;王浩栋;陈卓芝 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;A62D3/02;A62D101/28 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌及构建及应用，其构建方法为：(1)化学合成锚定蛋白和PETase基因；(2)利用PCR将锚定蛋白和PETase基因连接，得到融合序列；(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体上，得到融合表达载体；(4)将融合表达载体转入表达宿主大肠杆菌中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌。本发明的构建将目的蛋白具有PET降解功能的PETase，通过inaK‑N、BrkA、AIDA或Lpp‑OmpA锚定蛋白定位到细胞表面，并具有生物催化活性高的特点，解决了野生菌株产PETase能力有限、生长周期长和降解速率慢的问题，且酶无需分离纯化，制备和使用简单。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 细胞表面展示 重组大肠杆菌 锚定蛋白 分解酶 融合表达载体 降解 大肠杆菌表达 生物催化活性 大肠杆菌 表达宿主 分离纯化 化学合成 基因连接 目的蛋白 生长周期 细胞表面 序列连接 野生菌株 融合 制备 应用 转入 基因 | ||
【主权项】：
1.细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌的构建，其特征是包括如下步骤：(1)化学合成锚定蛋白基因，化学合成如SEQ ID No.1所示的PETase基因；(2)利用PCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和PETase基因的核苷酸序列连接，得到融合序列；(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体pET22b上，得到融合表达载体；(4)将融合表达载体转入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组大肠杆菌。
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