[发明专利]细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母及构建与应用有效
| 申请号： | 201610912589.1 | 申请日： | 2016-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN106497964B | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 王泽方;杨海涛;王雪;童善惟;陈卓芝;程莹莹;侯宇佳 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;A62D3/02;C12R1/84;A62D101/28 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母及构建与应用，其构建为：(1)化学合成SEQ ID No.1所示的改良过的PET分解酶的核苷酸序列；从毕赤酵母GS115基因组中克隆出锚定蛋白基因的核苷酸序列；(2)利用OverlapPCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和改良过的PET分解酶基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到毕赤酵母表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主毕赤酵母中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母。本发明可以将PET分解酶锚定到细胞表面，固定化后的酶可做全细胞催化剂，相比于野生型稳定性高、回收方便、易控制、可反复利用。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 表面 展示 pet 分解 重组 酵母 构建 应用 | ||
【主权项】：
1.细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)化学合成SEQ ID No.1所示的改良过的PET分解酶基因的核苷酸序列；从毕赤酵母GS115基因组中克隆出锚定蛋白基因的核苷酸序列；(2)利用OverlapPCR将锚定蛋白基因的核苷酸序列和改良过的PET分解酶基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到毕赤酵母表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主毕赤酵母中，得到细胞表面展示PET分解酶的重组毕赤酵母；所述锚定蛋白基因为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述的GCW21、核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的GCW51或核苷酸序列如SEQ ID No.4所述GCW61。
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