[发明专利]一种WAVE无血清培养悬浮细胞制备重组腺病毒的方法

摘要

本发明提供了一种WAVE生物反应器无血清培养悬浮细胞制备重组腺病毒的方法，其包括细胞培养、病毒扩增和病毒纯化步骤，采用悬浮细胞培养方法，通过对细胞密度进行监测，同时根据培养过程中细胞密度的变化对生物反应器的摇摆速度和角度进行调整，以确保细胞培养的顺利进行。采用上述技术方案，摆脱了现有技术通常采用贴壁细胞培养制备重组腺病毒的传统做法，采用悬浮细胞培养，并采用WAVE生物反应器，解决了目前中试过程中采用血清培养贴壁细胞制备重组腺病毒所存在的技术缺陷和产品质量稳定性差的问题，也为生产工艺的放大提供了较为直接的理论和可行性数据支持。

主权项

一种WAVE无血清培养悬浮细胞制备重组腺病毒的方法，其特征在于：其包括以下步骤：步骤S1：确认WAVE设备运行正常以及细胞袋无菌情况正常后，取悬浮细胞种子液转移至细胞袋中进行细胞培养，细胞袋中细胞初始密度为3‑5×105个细胞/mL；设定培养参数为：温度37℃±1、二氧化碳浓度5%、通气量0.2Lpm；在培养过程，根据细胞密度逐级调整反应器摇摆速度和角度；步骤S2：步骤S1中进行灌注培养后，使用新鲜的培养基逐步稀释培养袋中的培养液，当细胞密度达到4‑6×106个细胞/ml时，计算细胞袋中总的细胞数量，调整病毒种子液中病毒颗粒数，按照MOI(VP/cell)=100:1~300:1接种重组腺病毒，染毒2‑3h后，启动灌注程序，进行病毒扩增，灌注速度5‑10L/d，调整反应器摇摆速度为15‑30rpm，摇摆角度为6‑12°，病毒扩增30‑48h后，离心收集细胞，预处理后进行纯化；步骤S3：先将步骤S2中收集的细胞进行纯化预处理，得到病毒纯化预处理样品，然后将病毒纯化预处理样品依次进行阴离子交换色谱层析和分子筛层析收集得到腺病毒。