[发明专利]一种小鼠骨髓微环境损伤模型的建立方法

摘要

本发明公开了一种小鼠骨髓微环境损伤模型的建立方法，通过电击装置简单方便精确安全稳定的造成小鼠骨髓微环境的损害，小鼠死亡率低。并且造模2周和4周后，骨髓微环境的恢复情况也有不同的变化，为研究血管再生以及分段观察骨髓微环境的损伤情况提供一个良好的技术平台。直接铁镍铬合金金属丝插入骨髓腔的方法，既可以保证骨髓微环境的损害，又不会对股骨周围的血管神经肌肉等组织造成极大的损伤。采用1ml注射器针头钻孔，孔径小，对骨皮质的损害小，可以保证骨髓腔的完整性并减短恢复周期。金属丝的插入，减小了电击所需的电压和时间，操作更安全。整个电击装置所需仪器便宜安全，具有较强的稳定性。

主权项

一种小鼠骨髓微环境损伤模型的建立方法，其特征在于，具体步骤如下：将小鼠腹腔注射0.15ml浓度为5％水合氯醛麻醉，实验小鼠进入麻醉状态后，将其放置在消毒的工作台上，固定四肢；用2％碘伏对小鼠右后肢膝关节处手术区域进行消毒处理，采用无菌眼科剪切开皮层与肌层，并将髌骨推向一边，暴露股骨关节面；屈曲膝关节，将实验鼠股骨与操作台保持垂直；用1ml注射器针头在股骨关节面正中央与骨髓腔平行方向钻孔，边旋转边进针，深度为3‑5mm，恰有血液渗出时拔出；后将长度为1.5cm直径约为0.27mm材质为铁镍铬合金的金属丝轻轻插入小孔深度为6mm；将电针一段接触金属丝露出部分，另一端置于同一股骨近心端，两电极端的距离为2cm，调节时间控制器输入通电时间，调节可调变压器以及滑动变阻器输入通电电压，接通电源后造成骨髓微环境损伤；立刻取其双侧股骨浸入组织固定液固定，通过大体观察以及HE染色共聚焦显微镜观察得到能使骨髓微环境损伤的最小电压以及最短时间；按照此参数电击实验鼠股骨，电击后用生理盐水冲洗清除血块以及钻孔部位清理，不做其他处理，行关节复位，逐层缝合，关闭膝关节；术后注射青霉素钠2000u,1次/d，连续5d，以防感染；造模2周和4周以后取其双侧股骨观察骨髓微环境恢复情况。