[发明专利]草莓根腐病病原菌Ilyonectrianovozelandica的PCR快速检测方法在审
| 申请号： | 201610922423.8 | 申请日： | 2016-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN106520935A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 史芳芳;汪泉;李向泉;郭艳;向征;赵密珍;王明亮 | 申请（专利权）人： | 新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 830088 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 一种草莓根腐病病原菌Ilyonectria novozelandica的PCR快速检测方法，包括利用植物DNA提取试剂盒提取待检样品草莓根腐病株分离物的DNA作为模板；利用基于EF‑1α基因和histone H3基因进行设计的两对引物，进行PCR扩增反应；PCR产物电泳、染色，若存在800bp和500bp附近的DNA条带，则可判断待检样品感染了草莓根腐病Ilyonectria novozelandica病原菌。本方法无需进行基因测序和系统进化树分析，引物特异性高，检测准确，程序简化，方便快捷。 | ||
| 搜索关键词： | 草莓 根腐病 病原菌 ilyonectrianovozelandica pcr 快速 检测 方法 | ||
【主权项】：
草莓根腐病病原菌Ilyonectria novozelandica的PCR快速检测方法，其特征在于：(1)引物是基于EF‑1α基因和histone H3基因进行设计，两对引物的序列为nEF‑F：5’‑CACGTCGATTCTGGCAAGTC‑3’nEF‑R：5’‑TTGGTGGTGTCCATCTTGTT‑3’HIS‑F：5’‑AGGTCCACTGGTGGCAAG‑3’HIS‑R：5’‑AGCTGGATGTCCTTGGACTG‑3’(2)检测步骤为a.利用植物DNA提取试剂盒提取待检样品草莓根腐病株分离物的DNA作为模板；b.利用上述引物进行PCR扩增反应，扩增体系25μL包括模板DNA 1μL、含Mg2+PCR buffer mixl2.5μL、0.4μmol/L的上下游引物各1μL、Taq DNA聚合酶0.4μL、ddH2O 9.1μL：反应条件：94℃预变性4min；94℃变性30S，55℃退火30S，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸5min；c.PCR产物用1％的琼脂糖在1×TBE中进行电泳30min，用DNA核酸染料染色，根据凝胶电泳条带大小进行判断：若存在800bp和500bp附近的DNA条带，则可判断待检样品感染了草莓根腐病Ilyonectria novozelandica病原菌，否则为未感染。
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