[发明专利]固—液—液三步生物合成紫杉醇的方法及其专用的培养基

摘要

本发明公开了一种固—液—液三步生物合成紫杉醇的方法及其专用的培养基，将红豆杉细胞的培养增殖、调节培养及生产紫杉醇分为三步培养，第一步固体培养基培养：从红豆杉植物的枝条、叶片中诱导出愈伤组织，固体生长培养基上扩增继代，即用固体培养方式使细胞增殖；第二步调节培养：将红豆杉细胞团转入装有专用液体培养基的反应器,专用液体培养基含有增强细胞代谢的成分，可在2‑4天内促使细胞内紫杉醇代谢前体的含量增加，提高与紫杉醇代谢相关酶的活力，调节细胞的生理生化状态使之有利于紫杉醇的合成；第三步紫杉醇的生物合成：将第二步经调节培养的红豆杉细胞连同培养液通过无菌管道输入另一含有组合诱导子的专用生产培养基的反应器中，培养3‑5天，细胞内的紫杉醇含量达到0.3％以上。

主权项

1.一种用于固—液—液三步生物合成紫杉醇的专用的培养基，其特征在于，包括用于液体培养的调节培养基和合成培养基；所述调节培养基的配方为：KNO3 1000-1500mg/L、CaCl2·2H2O 75-150mg/L、(NH4)2SO430-70mg/L、NaH2PO4·H2O 50-150mg/L、CuSO4·5H2O 0.025-0.1mg/L、MgSO4·7H2O 250mg/L、KI 0.75mg/L、H3BO3 3.0mg/L、MnSO4·4H2O 10mg/L、ZnSO4·7H2O 2.0mg/L、Na2MoO4·2H2O0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、肌醇100mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫铵10mg/L、6-BA 0.2-0.5mg/L、NAA1.0-3.0mg/L、苹果汁50-100mL/L、乙酸钠8-10mg/L、苯丙氨酸15-20mg/L、烯效唑5-10mg/L、氯化氯代胆碱0.5-1.0mg/L、水杨酸0.5-1.0mg/L、蔗糖20-30g/L，用水定容至1升；所述合成培养基的配方为：KNO3 800-1250mg/L、CaCl2·2H2O 50-100mg/L、(NH4)2SO435-150mg/L、NaH2PO4·H2O 75-100mg/L、KI 0.75mg/L、H3BO3 3.0mg/L、MnSO4·4H2O 10mg/L、ZnSO4·7H2O 2.0mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、Na2-EDTA37.3mg/L、FeSO4·7H2O 27.8mg/L、肌醇100mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫铵10mg/L、6-BA 0.5mg/L、NAA 2.0mg/L、过氧化氢10-12μL/L、柠檬酸铵15mg-20mg/L、甲基茉莉酮酸100-200μmol/L、蔗糖50-60g/L,用水定容至1升。