[发明专利]斜纹夜蛾固醇转运蛋白稳定转化的细胞株及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201610935108.9 | 申请日： | 2016-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN106480094A | 公开（公告）日： | 2017-03-08 |
| 发明（设计）人： | 刘琳;冯启理;万星;张丽丽;郑思春;梁丽宁 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295 | 代理人： | 黄为 |
| 地址： | 510631 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种斜纹夜蛾固醇转运蛋白稳定转化的细胞株的制备方法，包括依次进行的以下步骤步骤1从斜纹夜蛾克隆SCP‑2基因的cDNA；步骤2把编码SCP‑2蛋白的cDNA克隆进入pcDNA5/FRT质粒，形成重组的pcDNA5/FRT‑SCP2质粒；步骤3用该pcDNA5/FRT‑SCP2质粒转化大肠杆菌，经培养后获得转化的大肠杆菌；步骤4从转化的大肠杆菌中提取重组的质粒DNA，并进行纯化；步骤5用经过纯化的重组pcDNA5/FRT‑SCP2质粒DNA转染中国仓鼠卵巢细胞；步骤6转染后的CHO细胞在含有抗生素hygromycinB的培养基中进行筛选及连续的继代培养即得。本发明的目的在于提供一种斜纹夜蛾固醇转运蛋白稳定转化的细胞株及其制备方法和应用，该细胞株具有筛选精度高、操作简单、结果准确的优势。 | ||
| 搜索关键词： | 斜纹 夜蛾 固醇 转运 蛋白 稳定 转化 细胞株 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种斜纹夜蛾固醇转运蛋白稳定转化的细胞株的制备方法，其特征在于，包括依次进行的以下步骤：步骤1：从斜纹夜蛾克隆SCP‑2基因的cDNA；步骤2：把编码SCP‑2蛋白的cDNA克隆进入pcDNA5/FRT质粒，形成重组的pcDNA5/FRT‑SCP2质粒；步骤3：用该pcDNA5/FRT‑SCP2质粒转化大肠杆菌，经培养后获得转化的大肠杆菌；步骤4：从转化的大肠杆菌中提取重组的质粒DNA，并进行纯化；步骤5：用经过纯化的重组pcDNA5/FRT‑SCP2质粒DNA转染中国仓鼠卵巢细胞；步骤6：转染后的CHO细胞在含有抗生素hygromycinB的培养基中进行筛选及连续的继代培养即得。
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