[发明专利]一种食用菌菌种的单克隆高效选育方法

摘要

一种食用菌菌种的单克隆高效选育方法，将体积浓度为0.9％的生理盐水作为单克隆制备缓冲液，分装于试管，同时试管中加入不规则菌丝切割物；将食用菌菌种，无菌条件下转置试管中，震荡，至菌丝块均匀悬浮于试管，梯度稀释菌液；将单克隆筛选培养基无菌条件加入平皿中，冷却凝固，将不同梯度菌液涂布在多个平皿中，将菌液中的食用菌在平皿中培养，直至单克隆的出现。优点是该方法适用面广，担子菌、子囊菌均适用，具有普遍性；筛选菌种直观快捷、简单高效，短时间内即可通过菌丝形态、生长速度、显微形态等特征区分差异菌株，获得大量生物育种材料；在菌种选育过程中可直接获得菌株间拮抗生长信息，极大缩短选育时间，提高率。

主权项

一种食用菌菌种的单克隆高效选育方法，其特征是：具体步骤如下：(1)单克隆制备缓冲液的制备将9克氯化钠溶液于1000mL蒸馏水或纯水里，配置成质量体积比0.9％的生理盐水作为单克隆制备缓冲液，分装于试管；试管缓冲液1：每支试管1.0mL，同时试管中加入不规则菌丝切割物，胶塞封口；试管缓冲液2：每支试管0.9mL，同时试管中加入不规则菌丝切割物，胶塞封口；试管缓冲液1和试管缓冲液2中，不规则菌丝切割物为不规则形状的玻璃球或玻璃片；分装后的试管，121℃，灭菌20分钟‑30分钟，冷却备用；(2)将食用菌菌种，选取斜面培养或平皿培养前端菌丝，取3×3毫米菌丝块，无菌条件下转置步骤(1)制备的“试管缓冲液1”试管中，在1500rpm‑2000rpm震荡10分钟‑15分钟，至菌丝块均匀悬浮于试管；(3)梯度稀释步骤(2)“试管缓冲液1”菌液，即无菌条件下取“试管缓冲液1”0.1mL转置“试管缓冲液2”中，稀释成10‑2浓度菌液，1500rpm‑2000rpm震荡3分钟‑5分钟，依次稀释至显微镜40倍物镜观察30个视野，菌丝分布单一，无菌丝聚合为止；(4)单克隆制备依据食用菌性质选用单克隆筛选培养基，121℃，高压灭菌20分钟‑30分钟；将单克隆筛选培养基温度降至40℃‑50℃时，无菌条件加入平皿中，冷却凝固，将步骤(3)制备的不同梯度菌液涂布在多个平皿中，每个平皿加入0.1mL菌液，均匀涂布，将菌液中的食用菌在平皿中培养，直至单克隆的出现。