[发明专利]一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法

摘要

本发明涉及一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，属于鱼类RNA提取技术领域。其通过处理前准备、鱼的前处理、研磨、离心、二次离心、干燥和溶解得到鱼组织总RNA。本发明将样品、研磨珠和Trizol加入冷冻管中，经液氮冷冻以后装入高通量研磨仪中处理，一方面保证样品研磨过程中始终处于Trizol保护和低温状态，双重保护RNA防止降解；另一方面，相比于液体状态下（手动或者电动匀浆器匀浆）匀浆，低温干磨能缩短匀浆时间、匀浆更彻底。同时，研磨过程中样品始终在封闭的冻存管中，基本无样品损耗，因此本发明对初始样品量要求低，适于微量组织样品的总RNA提取。最后，本发明可同时研磨1‑50个样品，实现样品的批量处理，大大缩短了试验时间。

主权项

一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，其特征是步骤如下：（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡15‑30分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织20‑100mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品1‑50个，装入高通量组织研磨仪，以100‑120次/分的速度研磨5‑10分钟；（4）离心：取步骤（3）处理后的若干样品室温放置4‑6分钟，分别转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15‑30秒，室温放置2‑4分钟；2‑8℃、10000×g离心14‑16分钟；（5）二次离心：取步骤（4）所得清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟；2‑8℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，2‑8℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；（7）溶解：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入20‑200μL无RNase的水，‑70℃保存。