[发明专利]一种分离抗菌肽的方法

摘要

本发明公开了抗菌肽分离技术领域的一种分离抗菌肽的方法，包括原料制备、组织匀浆、免疫诱导、粗提液热处理、提纯和抗菌活性测定步骤，所述分离抗菌肽的方法的具体步骤如下：S1：原料制备；S2：组织匀浆；S3：免疫诱导；S4：粗提液热处理；S5：提纯；S6：抗菌活性测定；本发明利用家蝇作为原料，制备出天然抗菌肽，其制备工艺的副产品可作为畜禽、水产等动物养殖的蛋白饲料添加剂，实现对原材料的综合利用，该方法可大规模工厂化生产抗菌肽，生产周期短，生产成本较低，制得率较高，且受外在环境的影响较小，本发明制备工艺简便快速，抗菌肽的产率较高，其抗菌活性高。

主权项

一种分离抗菌肽的方法，包括原料制备、组织匀浆、免疫诱导、粗提液热处理、提纯和抗菌活性测定步骤，其特征在于：所述分离抗菌肽的方法的具体步骤如下：S1：原料制备：将家蝇以含有2‑4％蛋白粉，0.8‑1.1％酵母的麦麸为饲料，在相对湿度60‑70％的实验室内进行人工饲养繁殖；S2：组织匀浆：按家蝇1.2‑1.4g加液氮3‑5g的比例混合，用研钵将家蝇研磨成粉末状，并加入适量的缓冲液继续研磨至糊状，在3‑5℃下，5000×g离心50‑70min，取上清液，在‑70‑‑90℃保存；S3：免疫诱导：将家蝇放入盛有乙醚的培养皿内，使家蝇麻醉，将沾有诱导液的钢针穿透家蝇体壁，使家蝇体内产生抗菌肽；S4：粗提液热处理：取解冻的糊状家蝇幼体在振荡混匀器上混匀，并在沸水浴上加热4‑6min，然后在4℃，10000×g离心20‑40min，取上清液，并在‑70‑‑90℃保存；S5：提纯：将家蝇粗提液用300‑500目的检验筛过滤，通过离心过滤并分别收集截留部分和滤出部分；S6：抗菌活性测定：将抗菌肽菌株接种到培养基上，在25‑45℃培养至对数生长期，使用氯化钠溶液稀释后，采用K‑B药敏实验做抗菌活性测定，并以青霉素做参照。