[发明专利]一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法在审
| 申请号： | 201610942277.5 | 申请日： | 2016-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN106566840A | 公开（公告）日： | 2017-04-19 |
| 发明（设计）人： | 梅鑫;杨子银;周瀛;傅秀敏;东方 | 申请（专利权）人： | 中国科学院华南植物园 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/81 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510650 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体及其构建方法。本发明根据载体pPinkα‑HC序列，选择其中一段约300bp的序列设计一对引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F和pPinkα‑HCM‑BamH1‑R，在其两头的粘性末端酶Fse1和BamH1中插入了新的唯一的酶切位点Sal1、Pst1、PspOM、Nco1、Apa1、EcoR1，并在后面接上6个His标签CATCATCATCATCATCAT，实现了粘性末端的酶切位点数量多、内切酶的通用性好、价格低廉、酶切位点之间的间隔充裕、适合为双酶切提供保护碱基，同时还插入了6个His标签，以方便对获取的目标蛋白做Western blot验证。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 改良 酵母 蛋白 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种改良的毕赤酵母蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以载体pPinkα‑HC为模板，以上游引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F和下游引物pPinkα‑HCM‑BamH1‑R作为引物进行PCR扩增，扩增产物用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为插入子；将载体pPinkα‑HC用Fse1和BamH1双酶切，得到双酶切后的产物，命名为酶切载体，将插入子和酶切载体连接获得改良的毕赤酵母蛋白表达载体；所述的上游引物pPinkα‑HCM‑Fse1‑F的核苷酸序列为：5’‑GTAGGCCGGCCCTGCAGTCGACGGGCCCATGGAATTCATCATCATCATCATCATTGATTTAAATACAGGCCCC‑3’；所述的下游引物pPinkα‑HCM‑BamH1‑R的核苷酸序列为:5’‑CCGCGGATCCAGCTTGCA‑3’。
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